LncRNA-ANRIL通过调控miR‐181b介导PTEN对冠心病心肌损伤影响的机制研究

来源期刊：广州医药 | 1378-1383 发布时间：2025-10-20 收稿时间：2025/12/1 11:16:11 阅读量：135

作者：: 郭潮,

陈敏,

关键词：: 非编码长链 RNA ANRIL miR-181b 磷酸酶及张力蛋白同源物基因冠心病心肌损伤; lncRNA-ANRIL miR-181b PTEN coronary heart disease myocardial damage

DOI：: 10. 20223 / j. cnki. 1000-8535. 2025. 10. 008

收稿时间：: 2024-12-02
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目的探讨非编码长链 RNA ANRIL（lncRNA-ANRIL）通过调控miR‐181b 介导磷酸酶及张力蛋白同源物基因（PTEN）对冠状动脉粥样硬化性心脏病（冠心病）心肌损伤影响的机制。方法纳入2023年10月—2024年6月广州市第一人民医院30例确诊为冠心病的患者为观察组, 另选择同期本院体检中心30名健康者为对照组,检测两组研究者血压指标、血脂指标以及血清 lncRNA-ANRIL、miR-181b、PTEN水平, 并比较检测结果。结果两组的性别、年龄、BMI、吸烟、高血压一般资料对比差异无统计学意义（P>0.05）; 观察组收缩压、舒张压水平以及总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇水平均高于对照组,而高密度脂蛋白胆固醇则低于对照组（P<0.05）; 观察组血清 lncRNA ANRIL Exon 1-2、lncRNA ANRIL Exon 17-18相对表达水平以及PTEN水平低于对照组（t=12.623、7.741、8.231, P=0.001）, 而miR-181b水平则高于对照组（t=37.250, P=0.001）。结论相较于正常人群, 冠心病患者血清lncRNA-ANRIL和PTEN水平明显降低,而miR-181b水平升高,提示lncRNA-ANRIL可通过调控miR-181b来调节PTEN的表达, 从而影响冠心病心肌损伤的过程。

冠心病是一种常见的心血管疾病，其病理生理机制复杂多变，涉及多种遗传与环境因素的相互作用^［1］。该病主要源于冠状动脉粥样硬化，导致血管腔狭窄或阻塞，进而引起心肌缺血、缺氧乃至坏死^［2］。随着病情的发展，患者可能心肌损伤，不仅影响患者心脏功能，还直接关系到疾病的预后与转归。心肌损伤在冠心病中表现为心肌细胞死亡、纤维化及功能障碍，此过程涉及广泛的分子调控网络，包括基因表达异常、信号传导通路失衡等^［3］。近年来，非编码RNA，特别是长链非编码RNA（long noncoding RNA，LncRNA）在心血管疾病中的作用逐渐受到重视。LncRNA通过调控基因表达、影响蛋白质功能等多种方式，参与冠心病的发生与发展。其中，LncRNA-ANRIL作为一种新发现的冠心病相关LncRNA，其异常表达与冠心病的风险增加密切相关^［4］。研究表明，LncRNA-ANRIL能够通过竞争性结合微小RNA（microRNA，miRNA），如miR-181b，来调节下游靶基因的表达^［5］。miR-181b作为一种重要的miRNA，在多种生理病理过程中发挥关键作用，而磷酸酶与张力蛋白同源物（phosphatase and tensin homolog gene，PTEN）作为miR-181b的靶基因之一，是细胞内重要的信号转导调节因子，参与调控细胞增殖、凋亡及迁移等过程，对维持心肌细胞稳态至关重要^［6］。鉴于此，探讨LncRNA-ANRIL竞争性结合miR-181b介导PTEN对冠心病心肌损伤的影响机制，不仅有助于深入理解冠心病心肌损伤的分子基础，还可能为冠心病的早期诊断、治疗及预后评估提供新的思路。

1 资料与方法

^{1.1 对象}

纳入 2023 年10 月—2024年6月本院30例确诊为冠心病的患者为观察组，另选择同期本院体检中心30名健康者为对照组。纳入标准：①经冠状动脉造影确诊为冠心病者；②临床资料完整者；③对照组个体均无已知的重大疾病史，且既往健康状况良好；④观察组无其他严重并发症；⑤无传染性疾病；⑥已签署知情同意书者。排除标准：①伴有精神疾病者；②伴有自身免疫系统疾病者；③合并有其他器官严重疾病者，如血液疾病，恶性肿瘤等；④有严重酗酒、滥用药物者。本研究方案经医院伦理委员会审批通过（伦理批件号：K-2023-130-01）。

1.2 方法

两组受试者均需接受血压、血脂指标以及血清lncRNA-ANRIL、miR-181b表达水平和PTEN蛋白检测。具体流程如下。

1.2.1 研究对象基础资料收集收集研究对象的基础资料，包括性别、年龄、基础病史（如高血压、糖尿病、高脂血症）、吸烟史、体质指数（body mass index，BMI）、收缩压（systolic blood pressure，SBP）、舒张压（diastolic blood pressure，DBP）、总胆固醇（total cholesterol，TC）、甘油三酯（ triglyceride，TG）、低密度脂蛋白胆固醇（low-density lipoprotein cholesterol， LDL-C）和高密度脂蛋白胆固醇（high-density lipoprotein cholesterol，HDL-C）。

1.2.2 临床采样采集所有受试者清晨空腹血液样本，分别建立冠心病患者血清和同期健康对照人群的血清样本库，并将样本置于-196 ℃液氮中冻存，等待检测。

1.2.3 采用RT-PCR检测法检测lncRNA-ANRIL、miR-181b的表达水平采用 Trizol 抽提各组血清细胞中的总RNA，凝胶电泳检测总RNA提取的完整性。使用 PrimeScript^TM RT reagent kit with gDNA Eraser 试剂盒（RRO37A，TaKaRa，Japan）将1 μg 总 RNA 反转录成cDNA，按说明书步骤加入5×gDNA Eraser Buffer 和 gDNA Eraser 后42 ℃，2 min进行DNA去除反应，随后加入按照37 ℃反应15 min，85 ℃反应5 s进行逆转录得到cDNA。根据试剂盒的说明书（Thermo Fisher Scientific）通过 TaqMan miRNA Assays 测量 lncRNA-ANRIL、miR-181b 表达。采用 SYBR^®Premix Ex Taq^TM 试剂盒（RR820A，TaKaRa，Japan）于 ABI7500 定量PCR仪上进行RT-PCR实验，反应条件为 95 ℃预变性10 min，40个PCR 循环（95 ℃ 变性15 s，60 ℃ 退火30 s）。以GAPDH作为内参，采用2^-ΔΔCt法计算观察组与对照组血清中lncRNA-ANRIL、miR-181b 的表达水平。

1.2.4 采用Western blot 检测 PTEN的表达水平严格按照说明书加入PMSF和蛋白酶抑制剂提取组织或细胞总蛋白。4 ℃裂解15 min后以15 000 r/min离心15 min，提取上清液采用蛋白质含量检测试剂盒（BCA 试剂盒）测定每个样品的蛋白浓度。根据不同浓度进行定量，聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白后将蛋白转至PVDF膜上，5% BSA室温下封闭1 h，TBST 洗一次，4 ℃一抗 PTEN、GAPDH 孵育过夜。次日TBST洗膜10 min×3次，加入Horseradish Peroxidase（HRP）标记的山羊抗兔IgG 稀释液室温下孵育1.5 h。孵育完成后TBST洗膜5 min×3次，加入显影液，显影。ImageJ 1.48u 软件进行蛋白定量分析，以各蛋白的灰度值与内参GAPDH的灰度比值进行蛋白定量分析。每次实验重复3次，结果取平均值。

1.3 观察指标

（1）一般资料：比较两组受试者的性别、年龄、BMI、吸烟、糖尿病、高脂血症、高血压7项基础资料。

（2）血压指标：比较两组受试者SBP和DBP两项指标。

（3）血脂指标：比较两组受试者 TC、 TG、LDL-C和 HDL-C四项血脂指标。

（4）血清 lncRNA-ANRIL、miR-181b、PTEN：比较两组受试者血清 lncRNA-ANRIL、miR-181b、PTEN水平。

1.4 统计学分析

数据在SPSS22.0中录入，计数资料以n（%）表示，采用χ ²检验。计量资料以

表示，采用t检验。采取数据统计学分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 比较两组一般资料

两组受试者性别、年龄、BMI、吸烟、高血压一般资料对比差异无统计学意义（P＞0.05），观察组糖尿病、高脂血症者比例高于对照组（P＜0.05），见表1。

表1 两组患者一般资料对比 [,n（%），n=30]

项目	对照组	观察组	χ2/t	P
男/女（n）	17/13	16/14	0.067	0.795
年龄/岁	62.73±10.58	63.09±9.76	0.137	0.892
BMI/ (kg/m2）	21.65±1.79	22.13±1.61	1.092	0.279
吸烟	12（40.00）	18（60.00）	2.400	0.121
糖尿病	5（16.67）	13（43.33）	5.079	0.024
高脂血症	4（13.33）	12（40.00）	5.455	0.020
高血压	11（36.67）	14（46.67）	0.617	0.432

2.2 比较两组血压指标

观察组 SBP 、 DBP 水平高于对照组（ P＜0.05），见表2。

表2 两组患者血压指标对比（, n=30）

组别	SBP /mmHg	DBP/mmHg
对照组	117.54±17.40	73.28±11.12
观察组	130.15±20.16	80.31±11.74
t	2.594	2.381
P	0.012	0.021

2.3 比较两组血脂指标

观察组TC、TG、LDL-C水平均高于对照组，而HDL-C 则低于对照组（P＜0.05），见表3。

表3 两组患者血脂指标对比（, n=30）

组别	TC/ (mmol/L)	TG/ (mmol/L)	LDL-C/ (mmol/L)	HDL-C/ (mmol/L)
对照组	4.12±1.52	1.21±0.87	2.10±0.58	1.39±0.39
观察组	4.91±1.37	1.74±0.85	2.43±0.65	1.06±0.17
t	2.115	2.387	2.075	4.249
P	0.039	0.021	0.042	0.001

2.4 比较两组血清 lncRNA-ANRIL、miR-181b、PTEN 水平

观察组血清 lncRNA ANRIL Exon 1-2、Exon 17-18相对表达水平以及PTEN水平低于对照组，而miR-181b水平则高于对照组（P＜0.05），见表4、图1。

表4 两组患者血清 lncRNA-ANRIL、miR-181b、PTEN 水平对比（n=30）

组别	ANRIL relative level		PTEN/（ng/mL）	miR-181b
组别	Exon 1-2	Exon 17-18	PTEN/（ng/mL）	miR-181b
对照组	0.98±0.12	1.01±0.14	4.53±1.21	1.87±0.18
观察组	0.62±0.10	0.74±0.13	2.48±0.63	3.65±0.19
t	12.623	7.741	8.231	37.250
P	<0.001	<0.001	<0.001	<0.001

图 1 两组血清 lncRNA-ANRIL、miR-181b、PTEN 水平对比

3 讨论

冠心病是心血管疾病的主要类型，其发病机制涉及血管内皮损伤、脂质代谢异常、炎症反应等多方面的因素^［7］。这些病理过程最终会导致冠状动脉粥样硬化，使得血管腔狭窄或闭塞，从而引发心肌缺血、缺氧及损伤^［8］。心肌损伤不仅影响患者心脏正常功能，还可能导致心力衰竭、心律失常等严重后果^［9］。常规诊断方法如心电图、超声心动图等虽然能够提供一定的诊断信息，但其在早期识别方面的敏感性较低。近年来，随着分子生物学和生物信息学的发展，越来越多的研究表明，一些特定的生物标志物在冠心病心肌损伤的早期识别与诊断中具有重要价值。

LncRNA-ANRIL是一种长链非编码RNA，能够通过调节基因表达、影响细胞增殖和凋亡等多个途径参与冠心病的病理过程^［10-11］。MiR-181b是一种重要的miRNA，在多种生理病理过程中发挥关键作用^［12-13］。而PTEN是细胞内重要的信号传导调节因子，参与调控细胞增殖、凋亡及迁移等过程，对维持心肌细胞稳态至关重要^［14］。研究推测，ncRNA-ANRIL可作为miR-181b的一个调节靶点，通过 miRNA海绵作用吸附 miR-181b，进而影响其靶基因 PTEN 的表达水平。本次研究结果显示，观察组血清 lncRNA ANRIL Exon 1-2、Exon 17-18相对表达水平以及PTEN水平低于对照组，而miR-181b水平则高于对照组（P＜0.05），表明在冠心病心肌损伤中，LncRNA-ANRIL、miR-181b和PTEN之间存在复杂的调控关系，可影响患者心肌损伤进程与发展。在冠心病中，lncRNA-ANRIL表达水平明显降低，其竞争性结合 miR-181b 的能力被削弱，使其表达水平明显升高。而PTEN作为miR-181b的潜在靶基因之一，其表达会因此受到调控。PTEN水平降低可抑制磷脂酰肌醇-3-激酶（phosphatidylinositol 3-Kinase， PI3K）/蛋白激酶B（protein kinase B，PKB）/雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）信号通路的激活，从而影响心肌细胞的生长，参与早期冠心病的发生发展（图2）^［15］。因此，调节上述各指标表达水平，可有效改善心肌细胞的生存和功能，从而减轻心肌损伤，改善患者预后。

图 2 lncRNA-ANRIL、miR-181b 与 PTEN 关系图

本次研究还发现，相较于健康人群，冠心病患者SBP、DBP水平以及TC、TG、LDL-C水平更高，HDL-C 水平更低。其中，血压水平升高可损害血管内皮，加速动脉粥样硬化，导致心肌供血不足，从而引发损伤。而血脂异常则会促进脂质沉积，加重动脉粥样硬化，进一步影响心肌供血，加剧损伤。因此，在调控生物标志物水平的同时，加强血压和血脂控制对于减轻冠心病患者心肌损伤至关重要。

综上所述，LncRNA-ANRIL通过调控 miR-181介导PTEN可促进冠心病患者心肌损伤的发展与发展过程，临床需给予足够重视，加强对相关指标的调控，以控制患者病情发展，改善其预后。

1、ZHU%E2%80%83L%EF%BC%8CLIU%E2%80%83Z%EF%BC%8CZHANG%E2%80%83S%EF%BC%8Cet%E2%80%83al%EF%BC%8EAssociation%E2%80%83%0Abetween%E2%80%83blood%E2%80%83phosphorus%E2%80%83level%E2%80%83and%E2%80%83adverse%E2%80%83outcomes%E2%80%83%0Ain%E2%80%83patients%E2%80%83with%E2%80%83coronary%E2%80%83artery%E2%80%83disease%EF%BC%9AA%E2%80%83%20meta%E2%80%83%0Aanalysis%EF%BC%BBJ%EF%BC%BD%EF%BC%8EHeliyon%EF%BC%8C2024%EF%BC%8C10%EF%BC%8819%EF%BC%89%EF%BC%9Ae38565%EF%BC%8E

2、郭琼，石蕊，张建起，等．冠心病患者血清FFA与血脂水平的变化及其与心肌损伤程度的相关性［J］．西部医学，2020，32（11）：1650-1652，1657．

3、李延芳，顾方方，闵国美，等．慢性心力衰竭合并肺炎支原体感染外周血miRNA-21/PTEN表达与心肌损伤和预后的关系［J］．中华医院感染学杂志，2022，32（22）：3386-3390．

4、XU%E2%80%83Y%EF%BC%8CCAO%E2%80%83L%EF%BC%8CZOU%E2%80%83W%EF%BC%8Cet%E2%80%83al%EF%BC%8EPanax%E2%80%83notoginseng%E2%80%83saponins%E2%80%83inhibits%E2%80%83NLRP3%E2%80%83inflammasome-mediated%E2%80%83%0Apyroptosis%E2%80%83%20by%E2%80%83%20downregulating%E2%80%83lncRNA-ANRIL%E2%80%83in%E2%80%83%0Acardiorenal%E2%80%83syndrome%E2%80%83type%E2%80%834%EF%BC%BBJ%EF%BC%BD%EF%BC%8EChin%E2%80%83Med%EF%BC%8C%0A2023%EF%BC%8C18%EF%BC%881%EF%BC%89%EF%BC%9A50%EF%BC%8E

5、%E9%A9%AC%E9%9C%B2%EF%BC%8C%E6%9D%A8%E9%9B%B7%EF%BC%8C%E4%B8%81%E7%85%8C%EF%BC%8C%E7%AD%89%EF%BC%8E%E5%86%A0%E5%BF%83%E7%97%85%E8%A1%80%E6%B8%85%E5%A4%96%E6%B3%8C%E4%BD%93%E4%BB%8B%E5%AF%BC%E7%9A%84%0AlncRNA-miRNA-mRNA%E2%80%83ceRNA%E8%B0%83%E6%8E%A7%E7%BD%91%E7%BB%9C%E7%A0%94%E7%A9%B6%E5%8F%8A%E6%BD%9C%0A%E5%9C%A8%E9%9D%B6%E5%90%91%E4%B8%AD%E8%8D%AF%E9%A2%84%E6%B5%8B%E5%8F%8A%E5%AE%9E%E9%AA%8C%E9%AA%8C%E8%AF%81%EF%BC%BBJ%EF%BC%BD%EF%BC%8E%E4%B8%AD%E5%9B%BD%E8%8D%AF%E7%90%86%E5%AD%A6%E9%80%9A%0A%E6%8A%A5%EF%BC%8C2024%EF%BC%8C40%EF%BC%886%EF%BC%89%EF%BC%9A1153-1164%EF%BC%8E

6、熊纭辉，王娟，邓海华．miR-362-3p通过MAPK1/PTEN/AKT信号通路调节冠心病大鼠心肌细胞凋亡和内皮细胞损伤［J］．中西医结合心脑血管病杂志，2023，21（14）：2582-2586．

7、员小利，王丹，井海云，等．老年冠心病患者PCI术后心肌再灌注损伤与ERK/MAPK信号通路的相关性［J］．中国循证心血管医学杂志，2024，16（5）：561-563，568．

8、PAPPAS%E2%80%83M%E2%80%83A%EF%BC%8CFELDMAN%E2%80%83L%E2%80%83S%EF%BC%8CAUERBACH%E2%80%83A%E2%80%83D%EF%BC%8E%0ACoronary%E2%80%83disease%E2%80%83risk%E2%80%83prediction%EF%BC%8Crisk%E2%80%83reduction%EF%BC%8Cand%E2%80%83%0Apostoperative%E2%80%83myocardial%E2%80%83injury%EF%BC%BBJ%EF%BC%BD%EF%BC%8EMed%E2%80%83Clin%E2%80%83North%E2%80%83%0AAm%EF%BC%8C2024%EF%BC%8C108%EF%BC%886%EF%BC%89%EF%BC%9A1039-1051%EF%BC%8E

9、冯莉莉，王朝华，李贺，等．microRNA-429与稳定型冠心病患者冠状动脉病变和心肌损伤相关指标的关系［J］．标记免疫分析与临床，2022，29（4）：657-660，704．

10、王萌萌，金钊，张秀静，等．lncRNA-ANRIL、PON1在冠心病血清中的表达及其临床意义［J］．现代生物医学进展，2022，22（9）：1790-1794．

11、宫柏琪，张琳，王娜，等．miR-181b在冠心病慢性心力衰竭患者血清中的表达及其临床意义［J］．现代生物医学进展，2020，20（11）：2110-2113，2041．

12、%E5%AD%9F%E5%AE%AA%E6%9D%B0%EF%BC%8C%E5%88%98%E8%95%8A%EF%BC%8C%E6%9B%B9%E4%B8%BD%E6%85%A7%EF%BC%8C%E7%AD%89%EF%BC%8E%E9%95%BF%E9%93%BE%E9%9D%9E%E7%BC%96%E7%A0%81RNA%E2%80%83%0AMIAT%E5%9C%A82%E5%9E%8B%E7%B3%96%E5%B0%BF%E7%97%85%E5%90%88%E5%B9%B6%E5%86%A0%E5%BF%83%E7%97%85%E6%82%A3%E8%80%85%E8%A1%80%E6%B8%85%E4%B8%AD%E7%9A%84%E6%B0%B4%E5%B9%B3%E5%8F%8A%0A%E5%AF%B9%E9%AB%98%E7%B3%96%E8%AF%B1%E5%AF%BC%E7%9A%84%E5%BF%83%E8%82%8C%E7%BB%86%E8%83%9E%E6%8D%9F%E4%BC%A4%E7%9A%84%E5%BD%B1%E5%93%8D%EF%BC%BBJ%EF%BC%BD%EF%BC%8E%E4%B8%AD%E5%9B%BD%E5%8A%A8%0A%E8%84%89%E7%A1%AC%E5%8C%96%E6%9D%82%E5%BF%97%EF%BC%8C2023%EF%BC%8C31%EF%BC%886%EF%BC%89%EF%BC%9A481-490%EF%BC%8E

13、程航，夏敏．冠心病患者血清DKK-1、microRNA-181b、cTnI水平与冠脉病变程度的关系［J］．武汉大学学报（医学版），2020，41（3）：468-471．

14、JUSTICE%E2%80%83C%E2%80%83N%EF%BC%8CZHU%E2%80%83X%EF%BC%8CLI%E2%80%83J%EF%BC%8Cet%E2%80%83al%EF%BC%8EIntra-ischemic%E2%80%83%0Ahypothermia%E2%80%83cardioprotection%E2%80%83involves%E2%80%83modulation%E2%80%83of%E2%80%83%0APTEN%2FAkt%2FERK%E2%80%83signaling%E2%80%83and%E2%80%83fatty%E2%80%83acid%E2%80%83oxidation%EF%BC%BBJ%EF%BC%BD%EF%BC%8E%0APhysiol%E2%80%83Rep%EF%BC%8C2023%EF%BC%8C11%EF%BC%884%EF%BC%89%EF%BC%9Ae15611%EF%BC%8E

15、何娟，蒋肖潇，何秀波．miR-19b对冠心病大鼠血管内皮细胞损伤的影响及PTEN/PI3K/AKT信号通路的作用［J］．检验医学与临床，2024，21（18）：2657-2663，2669．

1、广州市科技计划项目（2023A03J0960）; 广州市卫生科技健康项目（20231A011002）()