GSDME对SKOV-3卵巢癌细胞化疗耐药的影响

来源期刊：广州医药 | 1363-1371 发布时间：2025-10-20 收稿时间：2025/12/1 11:06:52 阅读量：132

作者：: 张渊,

白芷玉,

李琪,

闫俐嘉,

贾娟蓉,

冯勤梅,

尹海珍,

关键词：: 卵巢癌焦孔素E 化疗耐药地西他滨甲基化; ovarian cancer GSDME chemoresistant cisplatin methylation

DOI：: 10. 20223 / j. cnki. 1000-8535. 2025. 10. 006

收稿时间：: 2024-09-27
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引用总数：: 0

目的探讨卵巢癌化学治疗（化疗）耐药与焦孔素E（GSDME）基因的甲基化是否有关, 以及地西他滨是否可以通过去甲基化使GSDME蛋白表达水平升高从而逆转卵巢癌化疗耐药。方法顺铂逆浓度梯度构建SKOV-3卵巢癌耐顺铂细胞株（SKOV-3/DDP）; CCK8法检测耐药前后细胞株的半抑制浓度（IC₅₀）; 实时荧光定量甲基化特异性PCR法检测两组细胞中GSDME基因的甲基化水平; Wetern Blot检测两组细胞中GSDME的表达水平。将耐药细胞株用不同质量浓度的地西他滨处理,重复上述实验, 检测地西他滨处理前后细胞的IC₅₀、GSDME基因的甲基化水平及GSDME蛋白的表达程度。结果与SKOV-3细胞相比, SKOV-3/DDP中GSDME基因的甲基化水平升高（P<0.01）, 同时GSDME蛋白的表达水平降低（P<0.001）; 随着地西他滨作用浓度的升高, 耐药细胞中GSDME基因的甲基化程度逐渐降低, 蛋白的表达水平逐渐升高, 细胞的IC₅₀逐渐降低：在用0.5 μg/mL地西他滨处理耐药细胞后GSDME基因的甲基化水平虽然降低（P<0.01）, 但是此时蛋白的表达水平及耐药细胞的IC₅₀均无明显改变（P>0.05）; 当地西他滨的浓度增加到1.0 μg/mL时蛋白的表达水平才明显升高（P<0.05）, 而此时细胞的IC₅₀仍未见明显降低（P>0.05）; 待药物浓度达到1.5 μg/mL时, 细胞的IC₅₀才表现出明显的下降趋势（P<0.05）。结论 GSDME的表达与卵巢癌的化疗耐药密切相关, GSDME的高甲基化水平致使其低表达可促进卵巢癌的化疗耐药。但地西他滨可以通过去甲基化使卵巢癌耐药细胞中GSDME的表达水平升高, 从而增加卵巢癌细胞对化疗药物的敏感性, 进而逆转卵巢癌化疗耐药。

Objective To explore whether drug resistance in ovarian cancer is associated with gasdermin E（GSDME） methylation, and to explore whether decitabine can reverse ovarian cancer chemoresistance by increasing GSDME protein expression levels through demethylation．Methods The cisplatin-resistant cell line（SKOV-3/DDP）was constructed by inverse concentration gradient of cisplatin．Semi-inhibitory concentration（IC₅₀）of cell lines after drug resistance was detected using the CCK8 assay．Real-time fluorescence quantitative methylation-specific PCR was used to detect the methylation level of GSDME gene in the two groups of cells．Wetern Blot was used to detect the expression level of GSDME in the two groups of cells．Drug-resistant cell lines were treated with different concentrations of the demethylating drug decitabine．Experiments above were repeated to detect the methylation degree of IC₅₀ and GSDME genes and the expression level of GSDME protein in drug-resistant cells before and after decitabine treatment．Results Compared with SKOV-3 cells, the methylation level of GSDME gene in SKOV-3/DDP was significantly increased（P<0.01）, while the expression level of GSDME protein was significantly decreased（P<0.001）．With the increase of decitabine concentration, the methylation degree of GSDME gene in drug-resistant cells was gradually decreased, the expression level of protein was gradually increased, and the IC₅₀ of cells was gradually decreased：the methylation level of GSDME gene was decreased after 0.05 μg/mL decitabine treatment（P<0.01）, but there were no significant changes in protein expression level and IC₅₀ of drug-resistant cells（P>0.05）．The protein expression level was significantly increased when the concentration of local citabine was increased to 0.10 μg/mL（P<0.05）, while the IC50 of the cells was not significantly decreased（P>0.05）．When the drug concentration reached 0.15 μg/mL, he IC₅₀of the cells showed a significant downward trend（P<0.05）．Conclusions The expression of GSDME is closely related to chemoresistance in ovarian cancer, and the low expression of GSDME due to its high methylation level can promote chemoresistance in ovarian cancer．However, decitabine can increase the expression level of GSDME in drug-resistant ovarian cancer cells through demethylation,thereby increasing the sensitivity of ovarian cancer cells to chemotherapeutic drugs, and then reversing the chemoresistance of ovarian cancer．

卵巢癌是女性生殖系统恶性程度最高的肿瘤，据2017年的数据统计，全球每年约有29万人患卵巢癌，其中15万人死亡^［1］，严重威胁着女性的生命健康。但由于其早期缺乏典型症状及有效的诊断方法，早期诊断十分困难，在发现时70%已处于晚期^［2-3］。目前手术及铂类联合紫杉醇化学治疗（化疗）是治疗卵巢癌的主要手段^［4］，但由于化疗耐药的出现，使卵巢癌患者的预后极差^［5］。

细胞焦亡是一种新发现的区别于凋亡，并快于凋亡的程序性死亡，其发生过程伴随着细胞膜的破裂、细胞内容物的释放及炎症反应的发生，故也称为“炎症性死亡”^［6］。近年来随着对细胞焦亡的深入研究，越来越多的研究表明焦亡在癌症的发生、发展中起着重要作用^［7］。焦孔素E（gasdermin E，GSDME）是介导细胞焦亡的关键蛋白之一。且最近的研究表明GSDME是一种肿瘤抑制因子^［8］，其可抑制肿瘤细胞的增殖，并可增加肿瘤细胞对化疗药物的敏感性^［9］。其在大多数正常组织中高表达，但在某些肿瘤组织中，由于其基因启动子区的高甲基化，使GSDME表观遗传失活^［10］。目前研究指出与正常的卵巢组织相比，GSDME在卵巢癌组织中表达水平较低^［11］，但关于甲基化是否导致GSDME在卵巢组织中表达降低尚未见报道。

DNA甲基化是一种最常见的表观遗传修饰，研究表明DNA的甲基化作为癌症早期诊断的生物标志物具有巨大的潜力^［12-13］。已有研究表明某些基因DNA的甲基化与卵巢癌的发生密切相关，如TNF、MUC1、CD44、ESR1、SIM1、PPP2R5C、PTEN、ZNF154、UBB和FOXO1等^［14-15］。但关于GSDME甲基化与卵巢癌化疗耐药之间的关系尚未见报道。

地西他滨是一种DNA甲基化转移酶抑制剂^［16］，其可逆转结直肠癌、乳腺癌、胃癌等肿瘤基因的甲基化^［17-19］，从而使基因表达上调。此外，在乳腺癌中也发现地西他滨可逆转GSDME的高甲基化状态，从而改善乳腺癌的化疗耐药^［13］。但关于其在卵巢癌耐药中的研究甚少。

本研究旨在揭露，GSDME是否由于其甲基化导致其在SKOV-3卵巢癌细胞株表达降低，及其与化疗耐药是否相关。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

McCoy’s 5A培养基（南京凯基生物科技有限公司）；胎牛血清（上海逍鹏生物科技有限公司）；DMSO、细胞裂解液、胰酶、蛋白酶抑制剂、SDS-PAGE蛋白上样缓冲液、SDS-PAGE凝胶快速配制试剂盒、BCA蛋白浓度测定试剂盒、转膜缓冲液、蛋白Marker、超敏ECL化学发光试剂盒、通用性抗体稀释液、CCK8试剂盒（北京赛文科技有限公司）；顺铂（上海碧云天生物技术有限公司）、重组Anti-DFNA5/GSDME抗体（上海Abcam公司）、GAPDH抗体（江苏华安生物有限公司）；M5 Hiper Universal DNA Mini Kit超强通用型DNA提取试剂盒、SYBR Permix Ex Taq（北京聚合美生物有限公司）。

1.2 细胞培养

SKOV-3购自南京凯基生物科技有限公司，SKOV-3/DDP由本课题组顺铂逆浓度梯度诱导构建。SKOV-3细胞株在McCoy’s 5A培养基中稳定生长，该培养基含有10%胎牛血清及1%青链霉素双抗。SKOV-3/DDP能在含0.05 μg/mL顺铂的培养基中稳定生长。这些细胞系在无药物的培养基中培养2周以上，进行后续实验。以上细胞株在37 ℃、5%CO₂培养箱中进行无菌培养。

1.3 卵巢癌耐顺铂细胞株的构建

采用逆浓度梯度法构建卵巢癌耐顺铂细胞株，将SKOV-3卵巢癌细胞培养至对数生长期，传代待细胞长满瓶底达80%，以顺铂首次负荷剂量为0.05 μg/mL加入到SKOV-3细胞中，待细胞能稳定生长在此浓度，后逐渐增加药物浓度（0.10 μg/mL、0.15 μg/mL、0.20 μg/mL、0.25 μg/mL、0.30 μg/mL、0.35 μg/mL、0.40 μg/mL、0.45 μg/mL、0.50 μg/mL），直至细胞能稳定的生长在含0.50 μg/mL顺铂的培养基中。此时测亲本细胞及耐药细胞的半抑制浓度（IC₅₀），其耐药指数RI（R=IC_{50耐药细胞}/IC_{50亲本细胞}）＞4，且耐药细胞株复苏后，细胞的IC₅₀保持不变，即为耐药细胞株构建成功。耐药细胞在每次复苏后，都要在含0.50 μg/mL顺铂的培养基中激发其抗性，并且用不含药物的培养基培养2周后进行后续实验。

1.4 细胞IC₅₀的测定

根据CCK-8试剂盒的说明书检测肿瘤细胞的IC₅₀，即将对数生长期的SKOV-3、SKOV-3/DDP及用不同浓度DAC刺激24 h后的SKOV-3/DDP细胞株接种到96孔板上，每孔接种5 000个细胞，培养24 h后加入含不同浓度的顺铂的完全培养基（0 μg/mL、1.0 μg/mL、2.0 μg/mL、3.0 μg/mL、4.0 μg/mL、5.0 μg/mL、6.0 μg/mL、7.0 μg/mL、8.0 μg/mL）培养24 h，后每孔加入含10% CCK-8试剂的培养基100 μL，37 ℃孵育1 h，用多功能酶标仪检测450 nm的吸光度。

1.5 甲基化荧光定量聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）

（1）DNA提取：取对数生长期的细胞制成悬浮液，根据DNA提取试剂盒说明书进行DNA提取；（2）检测DNA浓度：用分光光度计测260 nm处的吸光度，DNA浓度（μg/mL）=OD₂₆₀×50×稀释倍数；（3）DNA重亚硫酸盐修饰：按照DNA甲基化修饰试剂盒说明书进行DNA转化，所得DNA用于后续GSDME甲基化检测；（4）PCR扩增：以GSDME甲基化的引物进行扩增，采用荧光定量PCR试剂盒配制PCR反应体系（样本DNA 2 μL、10 μL 2× M5 HiperSYBR Premix EsTaq、MSF 0.4 μL、MSR 0.4 μL、ROX Reference Dye Ⅰ 0.4 μL、ddH2O 6.8 μL，总反应体系20 μL），后进行PCR扩增，反应条件（95 ℃ 10 min；95 ℃ 10 s，60 ℃ 20 s，45个循环；40 ℃ 1 s），待扩增完成后使用配套仪器AB17500实时荧光定量PCR分析仪对数据进行读取、分析。根据实验结果绘图、分析。

甲基化判定标准：（1）内参基因β-actin的CT值≤36，甲基化GSDME基因的CT值≤40时为发生了甲基化；（2）内参基因β-actin的ct值≤36，甲基化GSDME基因的CT值＞40时为未发生甲基化；（3）内参基因β-actin的CT值＞36或无CT值时为无效，不纳入统计。GSDME的基因甲基化数值的大小反映GSDME基因甲基化的程度，GSDME基因的CT值与GSDME基因的甲基化程度呈反比（即CT值越小，GSDME基因的甲基化程度越高）。GSDME甲基化及内参β-actin引物序列见表1。

表1 GSDME甲基化引物序列及内参β-actin引物序列

基因	产物序列	大小
GSDME	Upstream 5 '-3' GCGGGGATTTCGGTTGAGC	175 bp
	Downstream 5 '-3' GCCGAAACCTTTACTCGATCCG
β-actin	Upstream 5 '-3' TGGAATCCTGTGGCATCCATCCATGAAAC Downstream 5 '-3' TAAAACGCAGCTCAGTAACAGTCCG	268 bp

1.6 蛋白质印迹（Western blotting）法

将对数生长期的SKOV-3、SKOV-3/DDP接种于六孔板，待细胞贴壁达80%，在SKOV-3/DDP细胞中分别加入含0 μg/mL、0.5 μg/mL、1.0 μg/mL、1.5 μg/mL、2.0 μg/mL DAC的培养基培养72 h后收集各组细胞，冰上裂解30 min；利用BCA浓度测定试剂盒计算各样本的蛋白浓度，取25 μg/孔上样浓度计算所需上样量，按1∶4的比例在各组中加入上样缓冲液，100 ℃，10 min蛋白变性；根据快速配胶试剂盒说明书制胶，将等量的蛋白加入到配好的凝胶中，GSDME及GAPDH均在120 V电压下电泳90 min；随后进行湿转转膜120 min，将蛋白条带转到PVDF膜上；5%脱脂奶粉室温封闭2 h，重组Anti-DFNA5/GSDME抗体、GAPDH抗体4 ℃孵育过夜，二抗孵育2 h，TBST洗膜3次，每次10 min，加入显影剂显影并拍照，利用ImageJ软件分析条带灰度值。以上实验重复3次。

1.7 统计学方法

每组实验重复3次，采用SPSS 21.0进行数据分析，采用GraphPad Promise 9.0软件作图，均数用

表示，两组数据间的差异比较采用独立样本t检验，多组数据间的差异比较采用单因素方差分析，P＜0.05认为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 耐药细胞及亲本细胞的IC₅₀检测

在加入含有1 μg/mL顺铂的完全培养基后，与SKOV-3/DDP相比，SKOV-3细胞的存活率显著降低（P＜0.01），且在含有6 μg/mL顺铂的完全培养中SKOV-3/DDP仍可有部分存活，而SKOV-3细胞极少存活（P＜0.05）；但当顺铂浓度上升至7 μg/mL时，两者的细胞存活率差异无统计学意义，见图1。与SKOV-3细胞相比，SKOV-3/DDP细胞的IC₅₀显著升高（4.712±0.192）μg/mL vs（1.268±0.223）μg/mL，P＜0.000 1），RI为4.283±0.149（RI＞4）。

图 1 CCK-8 法检测顺铂处理后 SKOV-3 及 SKOV-3/DDP 细胞活力

注：（A）不同浓度顺铂作用下SKOV-3/DDP细胞与SKOV-3P细胞活力比较；（B）相同浓度顺铂作用下SKOV-3/DDP细胞与SKOV-3P

细胞活力比较，^* P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001，^****P＜0.000 1；ns 无意义。

2.2 不同浓度地西他滨处理SKOV-3/DDP细胞的IC₅₀检测

随着地西他滨浓度的升高（0 μg/mL、0.5 μg/mL、1.0 μg/mL、1.5 μg/mL、2.0 μg/mL），各组细胞的IC₅₀分别为（4.712±0.792）μg/mL、（4.468±0.036）μg/mL、（4.431±0.061）μg/mL、（4.111±0.136）μg/mL、（3.837±0.055）μg/mL。与未经吉西他滨处理的SKOV-3/DDP细胞相比，当地西他滨的浓度低于1.5 μg/mL时，耐药细胞的IC₅₀未见明显降低（均P＞0.05），而当地西他滨的浓度增加至1.5 μg/mL时，耐药细胞的IC50显著减低（P＜0.05），且当地西他滨的浓度增加到2.0 μg/mL时，耐药细胞的IC₅₀下降程度更加显著（P＜0.01）。见图2。

图 2 加入不同浓度地西他滨处理 SKOV-3/DDP 细胞 IC₅₀对比

2.3 SKOV-3、SKOV-3/DDP及用不同浓度地西他滨处理后各组细胞中GSDME基因的甲基化水平检测

与SKOV-3细胞相比，SKOV-3/DDP细胞中GSDME基因的甲基化水平显著升高（P＜0.01）（见图3A）；与未经地西他滨处理的SKOV-3/DDP细胞相比，用含有0.5 μg/mL地西他滨的完全培养基处理SKOV-3/DDP细胞后，细胞中的GSDME基因的甲基化水平显著降低（P＜0.01）；且随着地西他滨浓度的升高，GSDME基因的甲基化水平逐渐降低（均P＜0.05）（见图3B）；在2.0 μg/mL地西他滨作用下SKOV-3/DDP细胞中GSDME基因的甲基化水平较SKOV-3细胞中GSDME基因的甲基化水平更低（P＜0.01）（见图3C）。

图 3 各组细胞 GSDME 基因甲基化程度对比

注：DAC：Decitabine，地西他滨；（A）SK-0V-3与SKOV-3/DDP中GSDME基因的甲基化水平对比；（B）用分别含0 μg/mL、0.5 μg/mL、1.0 μg/mL、1.5 μg/mL、2.0 μg/mL地西他滨的培养基处理卵巢癌细胞系72 h后各组细胞中GSDME基因的甲基化水平；（CSK-0V-3、SKOV-3/DDP及2.0 μg/mL地西他滨作用下SKOV-3/DDP细胞中GSDME基因的甲基化水平对比。（两组比较，^* P＜0.05，^**P＜0.01；ns 无意义）

2.4 SKOV-3、SKOV-3/DDP及用不同浓度地西他滨处理后各组细胞中GSDME蛋白的表达情况

与SKOV-3细胞相比，SKOV-3/DDP细胞中GSDME蛋白的表达水平显著降低（P＜0.001）（见图4A）；与未经地西他滨处理的SKOV-3/DDP细胞相比，在用含有0.5 μg/mL地西他滨的完全培养基处理SKOV-3/DDP细胞后，细胞中的GSDME蛋白的表达水平无明显变化（P＞0.05）；而在用含有1.0 μg/mL地西他滨的完全培养基处理细胞后，GSDME蛋白的表达水平增高（P＜0.05），且随着地西他滨浓度的升高，GSDME蛋白的表达水平逐渐增高（见图4B）；在2.0 μg/mL地西他滨作用下SKOV-3/DDP细胞中GSDME蛋白的表达水平与SKOV-3细胞中GSDME蛋白表达水平无明显差异（P＞0.05）（见图4C）。

图 4 各组细胞中 GSDME 蛋白表达水平对比

注：DAC：Decitabine，地西他滨；（A）SK-0V-3与SKOV-3/DDP细胞中GSDME蛋白表达水平对比；（B）用分别含0 μg/mL、0.5 μg/mL、1.0 μg/mL、1.5 μg/mL、2.0 μg/mL地西他滨的培养基处理卵巢癌细胞系72 h后各组细胞中GSDME蛋白的表达水平；（C）SK-0V-3、SKOV-3/DDP及2.0 μg/mL地西他滨作用下SKOV-3/DDP细胞中GSDME蛋白表达水平对比。（ns代表实验组与对照组相比无意义，^* 代表P＜0.05，^**代表P＜0.01，^***代表P＜0.001）

3 讨论

在过去的几十年中，随着科研工作的进展，在肿瘤的预防、检测及治疗等方面取得了巨大的进步。卵巢癌作为女性生殖系统恶性程度最高的恶性肿瘤，由于其解剖学特征的隐匿性、早期常无明显的临床症状及缺乏有效的检测手段，使得大部分患者在确诊时已处于晚期，这是卵巢癌患者死亡率极高的原因之一。目前对于晚期卵巢癌的治疗为肿瘤细胞减灭术及术后以铂类为基础的联合化疗^［4］。顺铂为卵巢癌化疗的一线用药，其主要作用于细胞中的基因组DNA，造成DNA损伤，致使DNA、mRNA及蛋白质合成受阻，从而引发一系列级联反应，造成细胞死亡^［20-22］。但由于顺铂可上调DNA的修复途径，中和其对DNA的损伤作用，中和顺铂的细胞毒性从而产生耐药^［23］。其在诱导卵巢癌细胞死亡的同时，也会产生此现象，致使其化疗耐药。由于化疗耐药的发生使得卵巢癌预后极差，5年治愈率仅占30%^［24］。目前，为了解决卵巢癌化疗耐药的问题，主要采用低浓度梯度诱导法构建耐药细胞株的实验模型，用于体外研究。

肿瘤细胞的重要特征之一是逃避凋亡。因此，诱导细胞焦亡至关重要。细胞焦亡作为一种新发现的细胞死亡形式，越来越多的研究表明其与肿瘤的发生发展及化疗耐药存在着密切关系。GSDME作为焦孔素家族的重要成员之一，作用更甚。如在高表达GSDME的结肠癌、食管癌及胃癌组织中，肿瘤细胞的生长增殖能力及克隆能力均有所抑制，同时可增强癌细胞对化疗药物的敏感性^［25-27］，达到有效的抑瘤作用。此外，Li等 ^{［ 28 ］} 的研究也发现，在视网膜母细胞瘤中GSDME的表达水平显著降低，同时下调GSDME表达会降低细胞对化疗药物的敏感性。在结肠癌中也出现了类似的现象：GSDME通过增强结肠癌细胞中热蛋白的沉积，增加了结肠癌细胞对化疗药物伊立替康的敏感性^［29］。本实验也发现在耐顺铂的卵巢癌细胞株构建成功后，分别检测耐药前后细胞中GSDME蛋白的表达，结果显示，耐药细胞株的GSDME表达水平显著降低，说明GSDME的表达与卵巢癌的化疗耐药密切相关。

先前的研究表明在某些肿瘤中GSDME表达水平的降低是由于其基因甲基化所致。如Xia等^［30］在胃癌中发现GSDME表达沉默是由于其基因启动子区高甲基化所致，在用DNA甲基化转移酶抑制剂5-Aza-2’-deoxycytidine（5-Aza-CdR）处理后，胃癌细胞中GSDME的表达水平明显升高；Lu等^［31］发现胃癌中GSDME基因启动子区的高甲基化导致GSDME表达水平降低，促进了胃癌的进展；此外，在结肠癌组织中GSDME基因的甲基化水平较正常结肠组织高^［10］。为了验证在卵巢癌中GSDME表达水平降低是否也是由于其表观遗传修饰所致，本实验采用甲基化特异性PCR法检测耐药前后细胞中GSDME基因的甲基化水平，结果显示，在卵巢癌耐药细胞中GSDME基因的甲基化水平较非耐药细胞高，说明在卵巢癌耐药中GSDME表达水平的减低是由于基因的甲基化所致，这更进一步说明GSDME基因的高甲基化与卵巢癌的化疗耐药密切相关。

为了进一步验证地西他滨能否使GSDME去甲基化提高GSDME的表达，从而逆转卵巢癌化疗耐药，本实验在卵巢癌耐药的细胞系中加入地西他滨进行后续实验，结果显示，随着地西他滨浓度的增高，GSDME基因的甲基化水平逐步降低，GSDME蛋白的表达水平逐步增高，说明在卵巢癌耐药过程中存在着GSDME的表观遗传修饰，使GSDME表达水平降低。但是本研究也发现GSDME蛋白表达水平的增高与GSDME基因甲基化水平的降低并非同步。这一现象说明在耐药细胞株中导致GSDME表达水平降低，不仅仅是因为GSDME基因甲基化，或许存在其他的化学修饰，如棕榈酰化^［32］，这需要进一步的研究。我们的研究也发现随着GSDME表达水平的升高，耐药细胞对顺铂的敏感性也不断增加，说明地西他滨可以通过使GSDME基因去甲基化增加GSDME的表达，从而增强卵巢癌对化疗药物的敏感性。

综上所述，我们的研究发现在卵巢癌耐药细胞中存在着GSDME基因的甲基化，使GSDME蛋白表达水平降低，说明GSDME表达水平的降低可使卵巢癌细胞对化疗药物的敏感性减弱。但在加入地西他滨后GSDME基因的甲基化水平降低，随之GSDME蛋白的表达水平增高，同时耐药细胞对化疗药物的敏感性增加，说明地西他滨可通过使GSDME基因去甲基化提高GSDME的表达，从而逆转卵巢癌化疗耐药。这一发现将为卵巢癌的治疗提供新的思路。

1、REID%E2%80%83B%E2%80%83M%EF%BC%8CPERMUTH%E2%80%83J%E2%80%83B%EF%BC%8CSELLERS%E2%80%83T%E2%80%83A%EF%BC%8E%0AEpidemiology%E2%80%83of%E2%80%83ovarian%E2%80%83cancer%EF%BC%9AA%E2%80%83review%EF%BC%BBJ%EF%BC%BD%EF%BC%8E%0ACancer%E2%80%83Biol%E2%80%83Med%EF%BC%8C2017%EF%BC%8C14%EF%BC%881%EF%BC%89%EF%BC%9A9-32%EF%BC%8E

2、ELIAS%E2%80%83K%E2%80%83M%EF%BC%8CGUO%E2%80%83J%EF%BC%8CBAST%E2%80%83R%E2%80%83C%EF%BC%8EEarly%E2%80%83detection%E2%80%83of%E2%80%83%0Aovarian%E2%80%83cancer%EF%BC%BBJ%EF%BC%BD%EF%BC%8EHematol%E2%80%83Clin%E2%80%83N%E2%80%83Am%EF%BC%8C2018%EF%BC%8C32%0A%EF%BC%886%EF%BC%89%EF%BC%9A903-914%EF%BC%8E

3、LHEUREUX%E2%80%83S%EF%BC%8CBRAUNSTEIN%E2%80%83M%EF%BC%8COZA%E2%80%83A%E2%80%83M%EF%BC%8E%0AEpithelial%E2%80%83ovarian%E2%80%83cancer%EF%BC%9AEvolution%E2%80%83of%E2%80%83management%E2%80%83%0Ain%E2%80%83the%E2%80%83era%E2%80%83of%E2%80%83precision%E2%80%83medicine%EF%BC%BBJ%EF%BC%BD%EF%BC%8ECA%E2%80%83Cancer%E2%80%83%20J%E2%80%83%0AClin%EF%BC%8C2019%EF%BC%8C69%EF%BC%884%EF%BC%89%EF%BC%9A280-304%EF%BC%8E

4、SAMBASIVAN%E2%80%83S%EF%BC%8EEpithelial%E2%80%83ovarian%E2%80%83cancer%EF%BC%9AReview%E2%80%83%0Aarticle%EF%BC%BBJ%EF%BC%BD%EF%BC%8ECancer%E2%80%83Treat%E2%80%83Res%E2%80%83Commun%EF%BC%8C2022%0A%EF%BC%8833%EF%BC%89%EF%BC%9A100629%EF%BC%8E

5、YANG%E2%80%83L%EF%BC%8CXIE%E2%80%83H%E2%80%83J%EF%BC%8CLI%E2%80%83Y%E2%80%83Y%EF%BC%8Cet%E2%80%83al%EF%BC%8EMolecular%E2%80%83%0Amechanisms%E2%80%83of%E2%80%83platinumbased%E2%80%83chemotherapy%E2%80%83resistance%E2%80%83%0Ain%E2%80%83ovarian%E2%80%83cancer%EF%BC%88Review%EF%BC%89%EF%BC%BBJ%EF%BC%BD%EF%BC%8EOncol%E2%80%83Rep%EF%BC%8C%0A2022%EF%BC%8C47%EF%BC%884%EF%BC%89%EF%BC%9A82%EF%BC%8E

6、YU%E2%80%83P%EF%BC%8CZHANG%E2%80%83X%EF%BC%8CLIU%E2%80%83N%EF%BC%8Cet%E2%80%83al%EF%BC%8EPyroptosis%EF%BC%9A%0AMechanisms%E2%80%83and%E2%80%83diseases%EF%BC%BBJ%EF%BC%BD%EF%BC%8ESignal%E2%80%83%20Transduct%E2%80%83%0ATarget%E2%80%83Ther%EF%BC%8C2021%EF%BC%8C6%EF%BC%881%EF%BC%89%EF%BC%9A128%EF%BC%8E

7、RUAN%E2%80%83J%EF%BC%8CWANG%E2%80%83S%EF%BC%8CWANG%E2%80%83J%EF%BC%8EMechanism%E2%80%83%20and%E2%80%83%0Aregulation%E2%80%83of%E2%80%83pyroptosis-mediated%E2%80%83in%E2%80%83cancer%E2%80%83cell%E2%80%83death%0A%EF%BC%BBJ%EF%BC%BD%EF%BC%8EChem%E2%80%83Biol%E2%80%83Interact%EF%BC%8C2020%EF%BC%88323%EF%BC%89%EF%BC%9A109052%EF%BC%8E

8、SAEKI%E2%80%83N%EF%BC%8CKUWAHARA%E2%80%83Y%EF%BC%8CSASAKI%E2%80%83H%EF%BC%8Cet%E2%80%83al%EF%BC%8E%0AGasdermin%EF%BC%88Gsdm%EF%BC%89localizing%E2%80%83to%E2%80%83mouse%E2%80%83Chromosome%E2%80%83%0A11%E2%80%83is%E2%80%83predominantly%E2%80%83expressed%E2%80%83in%E2%80%83upper%E2%80%83gastrointestinal%E2%80%83%0Atract%E2%80%83%20but%E2%80%83%20significantly%E2%80%83%20suppressed%E2%80%83in%E2%80%83%20human%E2%80%83%20gastric%E2%80%83%0Acancer%E2%80%83cells%EF%BC%BBJ%EF%BC%BD%EF%BC%8EMamm%E2%80%83Genome%EF%BC%8C2000%EF%BC%8C11%0A%EF%BC%889%EF%BC%89%EF%BC%9A718-724%EF%BC%8E

9、GONG%E2%80%83W%EF%BC%8CFANG%E2%80%83P%EF%BC%8CLENG%E2%80%83M%EF%BC%8Cet%E2%80%83al%EF%BC%8EPromoting%E2%80%83%0AGSDME%E2%80%83%20expression%E2%80%83through%E2%80%83DNA%E2%80%83%20demethylation%E2%80%83to%E2%80%83%0Aincrease%E2%80%83chemosensitivity%E2%80%83of%E2%80%83%20breast%E2%80%83cancer%E2%80%83MCF-7%E2%80%83%2F%E2%80%83%0ATaxol%E2%80%83cells%EF%BC%BBJ%EF%BC%BD%EF%BC%8EPLoS%E2%80%83One%EF%BC%8C2023%EF%BC%8C18%EF%BC%883%EF%BC%89%EF%BC%9A%0Ae0282244%EF%BC%8E

10、IBRAHIM%E2%80%83J%EF%BC%8COP%E2%80%83DE%E2%80%83BEECK%E2%80%83K%EF%BC%8CFRANSEN%E2%80%83E%EF%BC%8Cet%E2%80%83%0Aal%EF%BC%8EMethylation%E2%80%83analysis%E2%80%83of%E2%80%83Gasdermin%E2%80%83E%E2%80%83shows%E2%80%83great%E2%80%83%0Apromise%E2%80%83as%E2%80%83a%E2%80%83biomarker%E2%80%83for%E2%80%83colorectal%E2%80%83cancer%EF%BC%BBJ%EF%BC%BD%EF%BC%8E%0ACancer%E2%80%83Med%EF%BC%8C2019%EF%BC%8C8%EF%BC%885%EF%BC%89%EF%BC%9A2133-2145%EF%BC%8E

11、BERKEL%E2%80%83C%EF%BC%8CCACAN%E2%80%83E%EF%BC%8EDifferential%E2%80%83expression%E2%80%83and%E2%80%83%0Acopy%E2%80%83number%E2%80%83variation%E2%80%83of%E2%80%83gasdermin%EF%BC%88GSDM%EF%BC%89family%E2%80%83%0Amembers%EF%BC%8Cpore-forming%E2%80%83proteins%E2%80%83in%E2%80%83pyroptosis%EF%BC%8Cin%E2%80%83%0Anormal%E2%80%83and%E2%80%83malignant%E2%80%83serous%E2%80%83ovarian%E2%80%83tissue%EF%BC%BBJ%EF%BC%BD%EF%BC%8EInflammation%EF%BC%8C2021%EF%BC%8C44%EF%BC%886%EF%BC%89%EF%BC%9A2203-2216%EF%BC%8E

12、LI%E2%80%83P%EF%BC%8CLIU%E2%80%83S%EF%BC%8CDU%E2%80%83L%EF%BC%8Cet%E2%80%83al%EF%BC%8ELiquid%E2%80%83biopsies%E2%80%83based%E2%80%83on%E2%80%83%0ADNA%E2%80%83methylation%E2%80%83as%E2%80%83biomarkers%E2%80%83for%E2%80%83the%E2%80%83detection%E2%80%83and%E2%80%83%0Aprognosis%E2%80%83of%E2%80%83lung%E2%80%83cancer%EF%BC%BBJ%EF%BC%BD%EF%BC%8EClin%E2%80%83Epigenetics%EF%BC%8C%0A2022%EF%BC%8C14%EF%BC%881%EF%BC%89%EF%BC%9A118%EF%BC%8E

13、LAM%E2%80%83K%EF%BC%8CPAN%E2%80%83K%EF%BC%8CLINNEKAMP%E2%80%83J%E2%80%83F%EF%BC%8Cet%E2%80%83al%EF%BC%8EDNA%E2%80%83%0Amethylation%E2%80%83based%E2%80%83biomarkers%E2%80%83in%E2%80%83colorectal%E2%80%83cancer%EF%BC%9A%0AA%E2%80%83systematic%E2%80%83review%EF%BC%BBJ%EF%BC%BD%EF%BC%8EBiochim%E2%80%83Biophys%E2%80%83Acta%EF%BC%8C%0A2016%EF%BC%8C1866%EF%BC%881%EF%BC%89%EF%BC%9A106-120%EF%BC%8E

14、EBATA%E2%80%83T%EF%BC%8CYAMASHITA%E2%80%83S%EF%BC%8CTAKESHIMA%E2%80%83H%EF%BC%8Cet%E2%80%83al%EF%BC%8E%0ADNA%E2%80%83methylation%E2%80%83marker%E2%80%83to%E2%80%83estimate%E2%80%83ovarian%E2%80%83cancer%E2%80%83cell%E2%80%83%0Afraction%EF%BC%BBJ%EF%BC%BD%EF%BC%8EMed%E2%80%83Oncol%EF%BC%8C2022%EF%BC%8C39%EF%BC%885%EF%BC%89%EF%BC%9A78%EF%BC%8E

15、GONG%E2%80%83G%EF%BC%8CLIN%E2%80%83T%EF%BC%8CYUAN%E2%80%83Y%EF%BC%8EIntegrated%E2%80%83%20analysis%E2%80%83%0Aof%E2%80%83gene%E2%80%83expression%E2%80%83and%E2%80%83DNA%E2%80%83methylation%E2%80%83%20profiles%E2%80%83in%E2%80%83%0Aovarian%E2%80%83cancer%EF%BC%BBJ%EF%BC%BD%EF%BC%8EJ%E2%80%83Ovarian%E2%80%83Res%EF%BC%8C2020%EF%BC%8C13%0A%EF%BC%881%EF%BC%89%EF%BC%9A30%EF%BC%8E

16、DHILLON%E2%80%83S%EF%BC%8EDecitabine%2Fcedazuridine%EF%BC%9AFirst%E2%80%83approval%0A%EF%BC%BBJ%EF%BC%BD%EF%BC%8EDrugs%EF%BC%8C2020%EF%BC%8C80%EF%BC%8813%EF%BC%89%EF%BC%9A1373-1378%EF%BC%8E

17、YU%E2%80%83G%EF%BC%8CWU%E2%80%83Y%EF%BC%8CWANG%E2%80%83W%EF%BC%8Cet%E2%80%83al%EF%BC%8EL%20ow%20-%20d%20o%20s%20e%E2%80%83%0Adecitabine%E2%80%83enhances%E2%80%83the%E2%80%83effect%E2%80%83of%E2%80%83PD-1%E2%80%83%20blockade%E2%80%83in%E2%80%83%0Acolorectal%E2%80%83cancer%E2%80%83with%E2%80%83microsatellite%E2%80%83stability%E2%80%83by%E2%80%83re%02modulating%E2%80%83the%E2%80%83tumor%E2%80%83microenvironment%EF%BC%BBJ%EF%BC%BD%EF%BC%8ECell%E2%80%83%0AMol%E2%80%83Immunol%EF%BC%8C2019%EF%BC%8C16%EF%BC%884%EF%BC%89%EF%BC%9A401-409%EF%BC%8E

18、BUOCIKOVA%E2%80%83V%EF%BC%8CTYCIAKOVA%E2%80%83S%EF%BC%8CPILALIS%E2%80%83E%EF%BC%8Cet%E2%80%83%0Aal%EF%BC%8EDecitabine-induced%E2%80%83DNA%E2%80%83methylation-mediated%E2%80%83%0Atranscriptomic%E2%80%83%20reprogramming%E2%80%83in%E2%80%83human%E2%80%83breast%E2%80%83cancer%E2%80%83%0Acell%E2%80%83lines%EF%BC%8Cthe%E2%80%83impact%E2%80%83of%E2%80%83DCK%E2%80%83overexpression%EF%BC%BBJ%EF%BC%BD%EF%BC%8E%0AFront%E2%80%83Pharmacol%EF%BC%8C2022%EF%BC%8813%EF%BC%89%EF%BC%9A991751%EF%BC%8E

19、%E2%80%83%20LI%E2%80%83L%EF%BC%8CNIU%E2%80%83Q%EF%BC%8CZHU%E2%80%83Y%EF%BC%8Cet%E2%80%83al%EF%BC%8EDecitabine%E2%80%83enhances%E2%80%83%0Athe%E2%80%83tumoricidal%E2%80%83potential%E2%80%83of%E2%80%83TRAIL%E2%80%83via%E2%80%83the%E2%80%83epigenetic%E2%80%83%0Aregulation%E2%80%83of%E2%80%83death%E2%80%83receptor%E2%80%834%E2%80%83in%E2%80%83gastric%E2%80%83cancer%EF%BC%BBJ%EF%BC%BD%EF%BC%8E%0AJ%E2%80%83Gastrointest%E2%80%83Oncol%EF%BC%8C2022%EF%BC%8C13%EF%BC%886%EF%BC%89%EF%BC%9A2799-2808%EF%BC%8E

20、%E2%80%83%20GHOSH%E2%80%83S%EF%BC%8ECisplatin%EF%BC%9AThe%E2%80%83first%E2%80%83metal%E2%80%83based%E2%80%83anticancer%E2%80%83%0Adrug%EF%BC%BBJ%EF%BC%BD%EF%BC%8EBioorg%E2%80%83Chem%EF%BC%8C2019%EF%BC%8888%EF%BC%89%EF%BC%9A102925%EF%BC%8E

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22、吴芷芷，惠青山，袁江．紫河车提取物联合顺铂对人胶质瘤细胞增殖凋亡的影响［J］．广州医药，2017，48（4）：25-28．

23、%E2%80%83%20KISS%E2%80%83R%E2%80%83C%EF%BC%8CXIA%E2%80%83F%EF%BC%8CACKLIN%E2%80%83S%EF%BC%8ETargeting%E2%80%83%20DNA%E2%80%83%0Adamage%E2%80%83%20response%E2%80%83%20and%E2%80%83%20repair%E2%80%83to%E2%80%83%20enhance%E2%80%83therapeutic%20%20index%E2%80%83in%E2%80%83cisplatin-based%E2%80%83cancer%E2%80%83treatment%EF%BC%BBJ%EF%BC%BD%EF%BC%8EInt%E2%80%83J%E2%80%83%0AMol%E2%80%83Sci%EF%BC%8C2021%EF%BC%8C22%EF%BC%8815%EF%BC%89%EF%BC%9A8199%EF%BC%8E

24、NOWAK%E2%80%83M%EF%BC%8CKLINK%E2%80%83M%EF%BC%8EThe%E2%80%83role%E2%80%83of%E2%80%83tumor-associated%E2%80%83%0Amacrophages%E2%80%83in%E2%80%83the%E2%80%83progression%E2%80%83and%E2%80%83chemoresistance%E2%80%83of%E2%80%83%0Aovarian%E2%80%83cancer%EF%BC%BBJ%EF%BC%BD%EF%BC%8ECells%EF%BC%8C2020%EF%BC%8C9%EF%BC%885%EF%BC%89%EF%BC%9A1299%EF%BC%8E

25、YIN%E2%80%83J%EF%BC%8CCHE%E2%80%83G%EF%BC%8CWANG%E2%80%83W%EF%BC%8Cet%E2%80%83al%EF%BC%8EInvestigating%E2%80%83the%E2%80%83%0Aprognostic%E2%80%83significance%E2%80%83of%E2%80%83pyroptosis-related%E2%80%83genes%E2%80%83in%E2%80%83%0Agastric%E2%80%83cancer%E2%80%83and%E2%80%83their%E2%80%83impact%E2%80%83on%E2%80%83cells%E2%80%99%E2%80%83%20biological%E2%80%83%0Afunctions%EF%BC%BBJ%EF%BC%BD%EF%BC%8EFront%E2%80%83Oncol%EF%BC%8C2022%EF%BC%8812%EF%BC%89%EF%BC%9A861284%EF%BC%8E

26、KIM%E2%80%83M%E2%80%83S%EF%BC%8CCHANG%E2%80%83X%EF%BC%8CYAMASHITA%E2%80%83K%EF%BC%8Cet%E2%80%83al%EF%BC%8E%0AAberrant%E2%80%83promoter%E2%80%83methylation%E2%80%83and%E2%80%83tumor%E2%80%83suppressive%E2%80%83%0Aactivity%E2%80%83of%E2%80%83the%E2%80%83DFNA5%E2%80%83gene%E2%80%83in%E2%80%83colorectal%E2%80%83carcinoma%0A%EF%BC%BBJ%EF%BC%BD%EF%BC%8EOncogene%EF%BC%8C2008%EF%BC%8C27%EF%BC%8825%EF%BC%89%EF%BC%9A3624-3634%EF%BC%8E

27、%E2%80%83%20WU%E2%80%83M%EF%BC%8CWANG%E2%80%83Y%EF%BC%8CYANG%E2%80%83D%EF%BC%8Cet%E2%80%83al%EF%BC%8EA%E2%80%83PLK1%E2%80%83kinase%E2%80%83%0Ainhibitor%E2%80%83enhances%E2%80%83the%E2%80%83chemosensitivity%E2%80%83of%E2%80%83cisplatin%E2%80%83%0Aby%E2%80%83inducing%E2%80%83pyroptosis%E2%80%83in%E2%80%83oesophageal%E2%80%83%20squamous%E2%80%83cell%E2%80%83%0Acarcinoma%EF%BC%BBJ%EF%BC%BD%EF%BC%8EEBioMedicine%EF%BC%8C2019%EF%BC%8841%EF%BC%89%EF%BC%9A%0A244-255%EF%BC%8E

28、LI%E2%80%83F%EF%BC%8CXIA%E2%80%83Q%EF%BC%8CREN%E2%80%83L%EF%BC%8Cet%E2%80%83al%EF%BC%8EGSDME%E2%80%83%20Increases%E2%80%83%0Achemotherapeutic%E2%80%83%20drug%E2%80%83%20sensitivity%E2%80%83%20by%E2%80%83%20inducing%E2%80%83%0Apyroptosis%E2%80%83in%E2%80%83retinoblastoma%E2%80%83cells%EF%BC%BBJ%EF%BC%BD%EF%BC%8EOxid%E2%80%83Med%E2%80%83%0ACell%E2%80%83Longev%EF%BC%8C2022%EF%BC%882022%EF%BC%89%EF%BC%9A2371807%EF%BC%8E

29、CHENG%E2%80%83M%E2%80%83Z%EF%BC%8CYANG%E2%80%83B%E2%80%83B%EF%BC%8CZHAN%E2%80%83Z%E2%80%83T%EF%BC%8Cet%E2%80%83al%EF%BC%8E%0AMACC1%E2%80%83and%E2%80%83Gasdermin-E%EF%BC%88GSDME%EF%BC%89regulate%E2%80%83the%E2%80%83%0Aresistance%E2%80%83of%E2%80%83colorectal%E2%80%83cancer%E2%80%83cells%E2%80%83to%E2%80%83irinotecan%EF%BC%BBJ%EF%BC%BD%EF%BC%8E%0ABiochem%E2%80%83Biophys%E2%80%83Res%E2%80%83Commun%EF%BC%8C2023%EF%BC%88671%EF%BC%89%EF%BC%9A236-%0A245%EF%BC%8E

30、XIA%E2%80%83Y%EF%BC%8CJIN%E2%80%83Y%EF%BC%8CCUI%E2%80%83D%EF%BC%8Cet%E2%80%83al%EF%BC%8EAntitumor%E2%80%83Effect%E2%80%83of%E2%80%83%0Asimvastatin%E2%80%83in%E2%80%83combination%E2%80%83with%E2%80%83DNA%E2%80%83methyltransferase%E2%80%83%0Ainhibitor%E2%80%83%20on%E2%80%83%20gastric%E2%80%83%20cancer%E2%80%83%20via%E2%80%83%20GSDME-mediated%E2%80%83%0Apyroptosis%EF%BC%BBJ%EF%BC%BD%EF%BC%8EFront%E2%80%83Pharmacol%EF%BC%8C2022%EF%BC%8813%EF%BC%89%EF%BC%9A%0A860546%EF%BC%8E

31、%E2%80%83%20LU%E2%80%83Y%EF%BC%8CHOU%E2%80%83K%EF%BC%8CLI%E2%80%83M%EF%BC%8Cet%E2%80%83al%EF%BC%8EExosome-delivered%E2%80%83%0Alncheih%E2%80%83%20promotes%E2%80%83%20gastric%E2%80%83%20cancer%E2%80%83%20progression%E2%80%83%20by%E2%80%83%0Aupregulating%E2%80%83ezh2%E2%80%83and%E2%80%83%20stimulating%E2%80%83methylation%E2%80%83of%E2%80%83the%E2%80%83%0AGSDME%E2%80%83promoter%EF%BC%BBJ%EF%BC%BD%EF%BC%8EFront%E2%80%83Cell%E2%80%83Dev%E2%80%83Biol%EF%BC%8C2020%0A%EF%BC%888%EF%BC%89%EF%BC%9A571297%EF%BC%8E

32、HU%E2%80%83L%EF%BC%8CCHEN%E2%80%83M%EF%BC%8CCHEN%E2%80%83X%EF%BC%8Cet%E2%80%83al%EF%BC%8EChemotherapy%02induced%E2%80%83pyroptosis%E2%80%83is%E2%80%83mediated%E2%80%83by%E2%80%83BAK%2FBAX-caspase-%0A3-GSDME%E2%80%83pathway%E2%80%83and%E2%80%83inhibited%E2%80%83by%E2%80%832-bromopalmitate%0A%EF%BC%BBJ%EF%BC%BD%EF%BC%8ECell%E2%80%83Death%E2%80%83Dis%EF%BC%8C2020%EF%BC%8C11%EF%BC%884%EF%BC%89%EF%BC%9A281%EF%BC%8E

1、山西省基础研究计划（202103021224387）()