肺泡灌洗液靶向高通量测序在鹦鹉热衣原体肺炎中的应用价值

来源期刊：广州医药 | 459-465 发布时间：2026-04-20 收稿时间：2026/5/27 16:43:16 阅读量：50

作者：: 葛立波,

苏阿丽,

黄巧露,

关键词：: 肺泡灌洗液靶向高通量测序常规病原学检测鹦鹉热衣原体肺炎诊断效能; bronchoalveolar lavage fluid targeted next-generation sequencing conventional etiological detection Chlamydia psittaci pneumonia diagnostic efficacy

DOI：: 10. 20223 / j. cnki. 1000-8535. 2026. 04. 009

收稿时间：: 2025-06-24
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目的探究肺泡灌洗液靶向高通量测序（tNGS）在鹦鹉热衣原体肺炎中应用效果。方法选取2021年5月—2025年3月我院收治的35例鹦鹉热衣原体肺炎患者进行研究，患者均接受肺泡灌洗液tNGS检测、肺泡灌洗液常规病原检测，以病原学为金标准，分析肺泡灌洗液tNGS对鹦鹉热衣原体肺炎的诊断效能。结果金标准对鹦鹉热衣原体阳性检出35例，检出率100.00%，肺泡灌洗液tNGS阳性检出率高于传统病原检测，检测结果回报耗时短于肺泡灌洗液传统病原检测（P＜0.05）。结论鹦鹉热衣原体肺炎临床症状缺乏特异性，容易转为重症肺炎，肺泡灌洗液tNGS可提高鹦鹉热衣原体肺炎检出率且结果回报较快，采用四环素类、喹诺酮类抗生素有助于改善患者预后。

鹦鹉热衣原体肺炎是由鹦鹉热衣原体引起的人畜共患传染病，近年来其发病率呈上升趋势，尤其在与禽类接触频繁的农村及家禽饲养者中更为明显^［1］。根据流行病学调查，该病原体可通过感染鸟类或家禽的排泄物形成气溶胶传播，约85%~90%的感染者表现为肺炎，重症患者可快速进展为急性呼吸窘迫综合征或多器官功能衰竭，病死率高达15%~20%^［2-3］。尽管该病临床特征为高热、干咳、肌痛及快速进展的肺部实变等，但缺乏特异性，易与流感或其他社区获得性肺炎混淆，加之常规病原学检测方法的局限性，临床误诊率较高^［4］。肺泡灌洗液靶向高通量测序（targeted next-generation sequencing，tNGS）技术具有无偏倚性、高灵敏度、快速回报等特征，成为肺炎诊断的热门方式^［5］。相对于传统方法，tNGS通过深度测序可直接检测肺泡灌洗液中的病原体核酸，避免了口咽部污染干扰，明显提高了下呼吸道感染的检出率。同时，其检测周期可缩短至24~48 h，为早期精准抗感染治疗提供关键依据，有效改善患者预后并减少不必要的广谱抗生素使用^［6］。有研究者发现，经tNGS确诊的下呼吸道感染患者中，针对性使用四环素类抗菌药物后，肺部病变及炎性指标均迅速改善，住院时间随之缩短^［7］。tNGS突破了传统培养周期长、血清学检测窗口期延迟等传统检测方法的局限性，能够快速、精准地检出肺泡灌洗液中潜在混合病原体，为早期诊断提供可靠依据；其还能全面揭示混合感染特征，帮助临床医生优化联合用药策略，从而提高治疗效果。但目前针对鹦鹉热衣原体肺炎的诊断与鉴别方面研究较为局限、单一。为此，本研究深入探讨肺泡灌洗液tNGS在鹦鹉热衣原体肺炎中的诊断价值，不仅有助于优化临床诊疗路径，也为新发或罕见呼吸道感染的病原学筛查提供了技术依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性选取2021年5月—2025年3月华侨大学附属厦门长庚医院收治的35例鹦鹉热衣原体肺炎患者。纳入标准：（1）符合《鹦鹉热诊疗中国专家共识》中鹦鹉热衣原体肺炎诊断标准^［8］；（2）呼吸道样本检测结果提示存在鹦鹉热衣原体病原微生物，或微免疫荧光实验检测结果提示抗鹦鹉热衣原体IgM抗体滴度≥1︰16；（3）临床表现为呼吸困难、发热、全身酸痛、咳嗽咳痰，伴或不伴胸腔积液；（4）年龄在18岁以上；（5）有与禽类或鸟类接触经历或相关禽类养殖经历。排除标准：（1）伴有其他肺部疾病；（2）依从性较差；（3）肺泡灌洗液样本或检测期间未通过tNGS质量控制；（4）外院转入本院治疗者；临床资料不完整。本研究患者知情并同意，本研究经华侨大学附属厦门长庚医院医学伦理委员会审核并通过（XMCGIRB2025047）。

1.2 方法

1.2.1 肺泡灌洗液tNGS检测方法（1）肺泡灌洗液采集：患者术前需禁食水4 h，以2%利多卡因实施咽鼻部表面麻醉后，使用电子支气管镜（奥林巴斯，290型）进行肺泡灌洗，采集步骤按照文献^［8］进行，严格按照无菌操作流程，灌洗部位由胸部影像学定位，影像异常的肺段视为局灶性病变，右肺中叶或左肺上叶舌段则视为弥漫性病变。支气管镜成功进入预先明确的支气管后，将60~120 mL的37 ℃的生理盐水以20~50 mL/次经操作孔缓慢注入，此后进行负压经灌洗液回收（压力25~100 mmHg，回收率40%~60%）。收集标本时优先选取第二管灌洗液（≥5 mL）进行tNGS检测，另取≥10 mL标本同步开展常规微生物培养及抗酸染色检测。（2）tNGS检测及结果判断：合格样本经干冰冷链运输至检测机构（金域医学检验实验室），严格遵循该公司标准化操作规范完成核酸提取及建库。进行tNGS检测，严格遵循该公司标准化规范。详细步骤：核酸双链分离→反转录合成cDNA→超多重PCR靶向扩增病原体特异性基因片段→NGS文库构建及质控→高通量测序→系统自动生成报告。（3）结果判断方法：基于病原体致病特性与检测参数建立分级诊断体系。①高/机会致病菌判定：主报告检出且符合以下阈值时优先考虑：a.高载量（≥1×10⁵拷贝/mL）伴强/中信号；b.中高载量（1×10²~1×10⁵拷贝/mL）伴强信号。②低致病性菌群判定：当主报告阴性而背景菌检出第三/四类病原体时，需结合充分临床信息（≥80%）综合判断。③灰区结果处理：检测到高/机会致病菌低拷贝（1~50拷贝/mL）且无有效信号时，需联合对超90%临床信息进行审慎解读。

1.2.2 肺泡灌洗液传统病原检测取10 mL肺泡灌洗液，应用VERTEX 70v型质谱仪（布鲁克光谱仪器公司）进行鉴定，使用H278961型全自动细菌鉴定仪（北京恒奥德仪器仪表有限公司）进行细菌生化鉴定，VITEK 2 Compact 70型全自动微生物鉴定和药敏分析系统（法国生物梅里埃公司）进行药敏试验。

1.3 观察指标

观察并比较肺泡灌洗液tNGS、传统病原检测鹦鹉热衣原体的阳性率及结果回报耗时，收集患者临床特征、血常规及血生化、影像学等检查结果。其中血常规及血生化相关指标正常范围参考标准：白细胞计数（white blood cell，WBC）为（3.5~9.5）×10⁹/L；血红蛋白（hemoglobin，HGB）为（115~150）g/L；中性粒细胞（neutrophil，NE）为37%~77%；超敏C反应蛋白（high-sensitivity C-reactive protein，hs-CRP）为≤5 mg/L；降钙素原（procalcitonin，PCT）为0~0.05 ng/mL；乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LDH）为120~250 U/L。

1.4 统计学方法

采用SPSS 26.0软件进行分析。本研究计量资料符合正态分布及方差齐性检验，采用均数±标准差

的形式表示，两组间比较采用双尾t检验，计数资料采用n（%）表示，组间比较采用χ²检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两种方法阳性检测结果比较

金标准对鹦鹉热衣原体阳性检出率100.00%，肺泡灌洗液tNGS阳性检出率高于肺泡灌洗液传统病原检测，检测结果回报耗时短于肺泡灌洗液传统病原检测（P＜0.05），见表1。

表1 两种方法阳性检测结果比较（n=35）

检测方法	阳性 [n（%）]	阴性 [n（%）]	检测结果回报耗时/h
tNGS	35（100.00）	0（0.00）	29.70±2.27
传统病原检测	3（8.57）	32（91.43）	33.38±2.37
χ2 /t	58.947		6.634
P	＜0.001		＜0.001

2.2 鹦鹉热衣原体阳性患者临床特征

标本来源均为肺泡灌洗液tNGS，35例鹦鹉热衣原体阳性患者中年龄31~72岁，男性23例、女性12例，均有禽类接触经历，合并基础疾病7例，转化为重症肺炎5例，首发症状为发热、畏寒、寒战、咳嗽、黄脓痰，伴随症状为头痛、乏力、肌肉酸痛、头晕、恶心。见表2。

表2 鹦鹉热衣原体阳性患者临床特征（n=35）

特征	n	%
性别
男	23	65.71
女	12	34.29
年龄
31~60岁	26	75.29
61~72岁	9	25.71
禽类接触史	35	100.00
基础疾病
冠心病	1	2.86
高血压	4	11.43
糖尿病	2	5.71
转化为重症肺炎
是	5	14.29
否	30	85.71
首发症状
发热	10	28.57
畏寒	8	22.86
寒战	6	17.14
咳嗽	5	14.29
黄脓痰	3	8.57
伴随症状
头痛	13	37.14
乏力	9	25.71
肌肉酸痛	6	17.14
头晕	4	11.43
恶心	3	8.57

2.3 鹦鹉热衣原体阳性患者的实验室检查结果

35例鹦鹉热衣原体阳性患者中，WBC升高22例，正常13例；HGB降低34例，正常1例；NE升高32例，正常3例；hs-CRP升高35例，正常0例；PCT升高34例，正常1例；LDH升高33例，正常2例；肝功能升高12例；肾功能升高9例；凝血部分升高12例；电解质紊乱27例。见表3。

表3 鹦鹉热衣原体阳性患者实验室结果（n=35）

项目	n	%
WBC升高	22	62.86
HGB降低	34	97.14
NE升高	32	91.43
hs-CRP升高	35	100.00
PCT升高	34	97.14
LDH升高	33	94.29
肝功能升高	12	34.29
肾功能升高	9	25.71
凝血指标部分升高	12	34.29
电解质紊乱	27	77.14

2.4 影像学检查结果

35例患者胸部X线或CT有肺炎表现，常见为单侧、下肺或中下肺片状浸润影，部分可呈大叶性实变，有时可见胸腔积液，经治疗后肺内病灶全部吸收，支气管通畅，纵隔及胸腔无异常。患者影像学特征见图1。

2.5 治疗方案与转归

35例鹦鹉热衣原体肺炎患者均接受了规范抗感染治疗。5例重症患者中有2例转院行体外膜肺氧合辅助治疗。所有患者治疗过程顺利，未出现药物不良反应或其他不良事件，平均住院时间为14.3 d，最终全部患者均好转出院，无死亡病例，见表4。

表4 治疗方案与预后转归（n=35）

药物名称	n	%
多西环素	19	54.29
美罗培南	5	14.29
莫西沙星	23	65.71
阿奇霉素	5	14.29
哌拉西林钠他唑巴坦钠	12	34.29
左氧氟沙星	2	5.71
亚胺培南-西司他丁钠	2	5.71
伏立康唑	2	5.71
体外膜肺氧合辅助治疗	2	5.71
头孢哌酮钠舒巴坦钠	5	14.29

3 讨论

传统诊断鹦鹉热衣原体肺炎方法主要依赖病原体培养、血清学抗体检测及聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）技术，但均存在明显不足。首先，鹦鹉热衣原体为专性细胞内寄生菌，体外培养条件苛刻且耗时长达数周，难以满足临床快速诊断需求。其次，血清学抗体检测受限于抗体产生滞后性，急性期敏感性不足，且与其他衣原体存在交叉反应，特异度较低。此外，PCR技术虽可提高检测速度，但需预设靶标基因，对罕见/变异病原体的覆盖能力有限，且痰液样本易受口咽部定植菌污染，导致假阴性或假阳性结果^［9-11］。有研究显示，传统方法的综合阳性检出率＜30%，而延迟诊断可能加重病情，增加重症风险及医疗成本^［12］。本研究中肺泡灌洗液tNGS检出鹦鹉热衣原体阳性患者35例，与金标准一致，且其阳性检出率及结果回报耗时优于传统病原检测，提示tNGS技术对鹦鹉热衣原体肺炎检测价值较高。可能是因为肺泡灌洗液直接反映感染部位，减少了背景干扰，提高了目标病原体检测灵敏度。tNGS技术直接检测样本中的微生物核酸序列，可覆盖包括难培养或非活性病原体在内的所有潜在微生物，突破了传统方法对活菌培养或预设靶标的依赖，显著提高检出率。同时tNGS可对病原体基因组进行深度测序，通过序列数及覆盖度区分鹦鹉热衣原体与其他相似病原体，且缩短了从经验性治疗到靶向治疗的过渡时间，改善患者预后^［13］。传统病原学检测低检出率，可能低估鹦鹉热患病率。

本研究结果显示，35例鹦鹉热衣原体阳性患者呈现男性居多、年龄偏大特征，其临床表现缺乏特异性标志，伴随症状涵盖神经系统、循环及消化等多系统，表明该病原体除攻击肺组织外还可诱发多脏器功能障碍。调查数据显示，所有感染者均有接触禽类史，这提示临床诊疗过程中应详尽了解患者流行病学背景，特别是与禽类的接触情况。值得注意的是，本研究中有7例伴有基础疾病，有5例转化为重症肺炎，因此应密切监测合并症患者，积极干预以降低病情加重风险。本研究实验室结果显示，患者主要表现为WBC升高22例、HGB降低34例、NE升高32例、hs-CRP升高35例、PCT升高34例、LDH升高33例，部分患者伴有肝脏、电解质、凝血紊乱，显示出鹦鹉热衣原体的快速发展、高重症风险。文献报告及研究证实，该病原体能够侵及心、肝、肾、神经及消化系统，短期内导致多器官功能障碍的临床表现及实验室指标异常^［14-15］。但常规实验室检查和影像学表现特异性有限。本研究典型影像学特征主要表现为肺实变，多为单侧、下肺或中下肺片状浸润影，部分可呈大叶性实变，有时可见胸腔积液，与既往研究^［16］报道一致。鹦鹉热衣原体肺炎的治疗方案尚未形成国际统一标准，但其对四环素类、喹诺酮类和大环内酯类抗菌药物敏感，这些药物通过抑制病原体DNA和蛋白质合成发挥治疗作用。本研究多西环素使用占比54.29%、莫西沙星使用占比65.71%、哌拉西林钠他唑巴坦钠使用占比34.29%。临床首选多西环素等四环素类药物，大环内酯类药物则适用于孕妇、儿童及四环素禁忌患者。重症病例可考虑多西环素联合喹诺酮类药物^［17］。值得注意的是，本研究中5例重症患者中有2例需体外膜肺氧合辅助治疗，提示该病可能快速进展为多器官功能衰竭。临床实践中，当经验性抗感染治疗效果不佳时，建议尽早进行肺泡灌洗液tNGS检测，并详细询问流行病学史。鉴于该病可能快速重症化，需重视综合治疗策略，包括联合抗菌药物治疗和必要时的呼吸支持，以改善患者预后。

综上所述，鹦鹉热衣原体肺炎临床症状缺乏特异性，容易转为重症肺炎，经肺泡灌洗液tNGS可提高鹦鹉热衣原体肺炎检出率且结果回报较快，可为临床治疗方案制定提供指导。但本研究的局限性在于病例数较少，今后需纳入更多病例数，延长随访时间以进一步完善结论。

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