胆管结扎诱导的梗阻性胆汁淤积对大鼠肝脏肝细胞影响的初步探究

来源期刊：广州医药 | 1165-1174 发布时间：收稿时间：2025/11/3 14:30:42 阅读量：20

作者：: 黄宇,

宫本大辅,

李天洋,

李佩霞,

翁杰锋,

古维立,

关键词：: 胆汁淤积性肝病肝细胞胆管细胞细胞可塑性胆管结扎; cholestatic liver disease hepatocyte cholangiocyte cell plasticity bile duct ligation

DOI：: 10. 20223 / j. cnki. 1000-8535. 2025. 09. 002

收稿时间：: 2024-12-01
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目的初步探究胆管结扎诱导的梗阻性胆汁淤积对大鼠肝细胞的影响。方法 10只Lewis大鼠随机分为对照组和胆汁淤积组,每组各5只,胆汁淤积组采用胆管结扎2周诱导梗阻性胆汁淤积大鼠模型。苏木精-伊红染色和苯胺蓝染色比较组织病理变化,使用生化分析比较两组小鼠肝功能情况。采用改良的两步胶原酶灌注分离原代肝细胞,通过RT-qPCR检测两组小鼠肝细胞标志基因、细胞增殖标志基因以及胆管细胞标志基因的表达情况。结果与对照组相比,胆汁淤积组肝脏表现为明显的肝组织紊乱和纤维胶原蛋白沉积以及肝功能的损害。胆汁淤积组较对照组的原代肝细胞更高表达细胞增殖标志基因：细胞增殖标志物（Ki67）基因,叉头盒M1蛋白（Foxm1）基因,增殖细胞核抗原（Pcna）基因和肝细胞生长因子（HGF）基因（P<0.05）;胆汁淤积组的原代肝细胞表达更低水平的肝细胞标志基因：白蛋白（Alb）基因,多药耐药相关蛋白2（Mrp2）基因,胆盐输出泵（Bsep）基因和肝细胞连环蛋白1（Catenin1）基因（P<0.05）,同时表达更高水平的胆管细胞标志基因：细胞角蛋白7（Ck7）基因,细胞角蛋白 19（Ck19）基因,胆管细胞多药耐药性蛋白1（Mdr1）基因和胆管细胞囊性纤维化跨膜传导调节因子（Cftr）基因（P<0.05）以及肝祖细胞标志基因：上皮细胞黏附分子（Epcam）基因和Y染色体性别决定区-盒转录因子9（Sox9）基因（P<0.05）。结论胆汁淤积可诱导肝细胞向胆管细胞特性转化的可塑性。

黄宇 华南理工大学附属第二医院（广州市第一人民医院）肝胆胰外科主治医师，广州医科大学外科学硕士，日本长崎大学医学博士。现为广东省基层医药学会转移性肝癌专业委员会委员，广州市医师协会青年医师分会委员会委员，广州市医师协会肝胆胰外科医师分会委员会委员，广州市医学会加速康复外科学分会委员会委员。任《广州医药》第一届青年编委，《中国普通外科杂志》第九届中青年编委，eGastroenterology第一届青年通讯编委。

致力于肝胆胰外科疾病的临床诊疗和科研工作，洞悉本专业领域国内外研究动向，尤其擅长荧光辅助下胆囊胆道等良性疾病的微创外科治疗。主持广东省医学科研基金项目课题1项，广州市科技计划项目课题2项，广州市中医药和中西医结合科技项目课题1项。获得实用新型技术专利2项。在国内期刊杂志上发表论文20余篇，以第一或通信作者发表 SCI 论文10篇。

胆汁淤积是指肝内外各种原因造成胆汁形成、分泌和排泄障碍，胆汁不能正常流入十二指肠而进入血液的病理状态，临床上可表现为瘙痒、乏力、尿色加深和黄疸等，病情进展后可出现高胆红素血症，严重者可导致肝硬化肝衰竭甚至死亡^［1］。既往国内研究显示^［1］，胆汁淤积发生率在10% ~35%。引起胆汁淤积的病因众多，临床上梗阻型肝外胆汁淤积通常由胆管结石、胆管寄生虫病、胆总管或胰腺囊肿、慢性胰腺炎、胆胰肿瘤、先天性肝外胆管闭锁、胆总管/Oddi括约肌狭窄等疾病引起^［2］。胆汁淤积性肝损伤的分子机制尚未阐明。深入研究梗阻性胆汁淤积肝损伤发生、发展的分子机制将为寻找干预胆汁淤积性肝病进展和逆转的有效靶点提供可靠的实验依据。

肝细胞-胆管细胞转化可发生在胆汁淤积性肝病（如原发性胆汁性胆管炎、原发性硬化性胆管炎和胆道闭锁等）、酒精性肝炎、非酒精性脂肪性肝病、肝硬化或原发性肝癌、胆管癌等临床常见肝胆道疾病中，其可表现为反应性增生的胆管效应^［3］，其在肝脏再生修复、肝脏纤维化发生和发展、肝硬化形成以及肝胆管癌的发生、发展中均有重要的参与作用。早期，Terada等^［4］发现在小鼠肝内胆管癌模型中，缺口受体（NOTCH）信号可介导肝细胞向胆管细胞转化；近年Hu等^［5］的研究发现NOTCH/Yes相关蛋白1（YAP1）/DNA甲基转移酶1（DNMT1）信号轴可驱动肝细胞重编程为肝内胆管细胞癌，这表明胆汁淤积与胆管癌的临床相关性。Sekiya等^［6］的研究发现，在慢性肝损伤中，肝细胞是新生胆管细胞的主要来源细胞，其通过NOTCH/HES1信号轴的激活实现肝细胞向原始胆管细胞的转化，表明肝细胞-胆管细胞转化在慢性肝损伤中肝再生与肝细胞命运转换的重要价值。然而，梗阻型胆汁淤积对肝细胞-胆管细胞转化的影响尚不完全清楚。

肝细胞占肝实质的90%以上，是肝损害时的最主要效应细胞。既往研究表明，肝细胞在受到急慢性损伤时，可逐渐转变为具有再生能力的祖细胞，在一定条件下也可转化为胆管细胞。尽管体内遗传谱系追踪方法的深入研究为肝脏细胞身份的鉴定和可塑性的探究提供大量新证据^［7］。然而，梗阻性胆汁淤积状态下肝细胞发生的变化仍不清楚，梗阻性胆汁淤积对肝细胞-胆管细胞转化的影响及其机制仍不明确。因此，本研究通过胆总管结扎方法建立大鼠梗阻性胆汁淤积模型，测定胆汁淤积对原代肝细胞的增殖相关基因、肝细胞标志基因以及胆管细胞标志基因的影响，以期初步探究胆汁淤积下肝细胞的基因层面的改变，为临床梗阻性胆汁淤积性肝损害发生机制提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 动物及分组

本动物实验在日本长崎大学医学院完成，长崎大学动物研究伦理委员会批准了本研究。10只7周龄（180±20 g）的雄性Lewis大鼠购置于日本CLEA公司，饲养于温度为20 ℃～26 ℃，相对湿度为40%～70%，昼夜交替时间为12/12 h的无特定病原体的环境。随机分成对照组和胆汁淤积组，每组各5只。采用胆管结扎方法建立胆汁淤积模型^［8-9］。大鼠用吸入异氟醚麻醉后，行中上腹部切开，暴露胆总管并用不可吸收的6-0单丝缝合线结扎2次，腹部用5-0丝线缝合。对照组采用同样方法切开腹部，暴露胆管不结扎，随后缝合腹部。两周后分别获取肝脏组织及分离原代肝细胞。

1.2 原代肝细胞分离

大鼠原代肝细胞分离采用改良的两步胶原酶灌注获取^［10］。予大鼠异氟醚麻醉后，充分暴露肝脏并分离门静脉，采用18 G套管插入门静脉后，先用预灌注缓冲液灌注肝脏，然后用胶原酶缓冲液灌注至肝脏基质胶原溶解完全。将肝脏转移到100 mm无菌玻璃皿中，用手术剪刀将肝脏切成碎片，收集肝细胞悬液，并通过棉网膜和45 μm不锈钢网过滤。然后，用分离缓冲液在4 ℃下以50 xg 离心2 min，然后在4 ℃下用40% Percoll Plus 溶液离心20 min去除死细胞。台盼蓝测定细胞活力后接种于肝细胞培养基中培养。

1.3 苏木精-伊红染色以及苯胺蓝染色

收集两组肝脏组织，固定后行石蜡包埋。切片、去蜡，按照标准技术用苏木精-伊红（H&E）和苯胺蓝（Azan）染色^［11］。

1.4 血清生化检测

肝细胞分离时于胶原酶灌注之前，通过门静脉收集血液1ml，4℃保存备用。使用生化分析仪检测血清中白蛋白、总胆红素、碱性磷酸酶、γ-谷氨酰转移酶、谷草转氨酶以及谷丙转氨酶的含量^［8］。

1.5 实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）

将分离的原代肝细胞样品用于mRNA提取。使用高容量cDNA逆转录试剂盒合成cDNA。使用TaqMan基因表达检测试剂盒（Applied Bio-systems）在PCR 系统上进行聚合酶链反应。检测采用 Gapdh 为内参，使用2^-∆∆Ct法测定基因的相对表达水平^［12］。实验用TaqMan引物见表1。

1.6 统计学分析

采用统计学软件GraphPad 9.0进行分析。数据以

表示，两组间比较采用t检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 胆汁淤积引起大鼠肝功能损害

与对照组对比，经过胆管结扎两周诱导的胆汁淤积模型肝脏颜色灰暗，表面失去光泽，肝脏体积稍显增大（图1A），H&E染色显示胆汁淤积组肝组织结构紊乱，肝小叶增生（图1B），纤维胶原蛋白Azan染色显示胆汁淤积组肝组织纤维胶原蛋白增生，明显肝纤维化形成（图1C）。进一步检测肝脏血清酶变化情况，结果显示胆汁淤积组大鼠肝脏合成白蛋白水平下降（图2A），血清总胆红素水平（图2B）、碱性磷酸酶水平（图2C）、γ-谷氨酰转肽酶水平（图2D）以及谷草转氨酶水平（图2E）明显较对照组升高（图2）。谷丙转氨酶未见明显改变（图2F）。由此可见，胆汁淤积引起大鼠肝脏肝功能损伤。

图 1 胆汁淤积引起大鼠肝组织损害

注：（A）对照组肝脏和胆汁淤积组肝脏大体观。对照组肝脏光泽鲜亮，胆汁淤积组肝脏灰暗肿大。（B）H&E染色显示两组肝组织病理情况（×4）。对照组肝组织正常，胆汁淤积组肝组织结构紊乱、小叶增生。（C）Azan染色显示肝脏纤维胶原蛋白的情况（×4）。对照组肝组织汇管区少了胶原沉积，胆汁淤积组大量胶原沉积。

图 2 胆汁淤积引起大鼠肝功能损害。

注：（A）两组血清白蛋白水平的对比，胆汁淤积组白蛋白水平较对照组下降（^***P＜0.001）。（B）两组总胆红素水平的对比，胆汁积组总胆红素水平较对照组升高（^***P＜0.001）。（C）两组碱性磷酸酶水平的对比，胆汁淤积组碱性磷酸酶水平较对照组升高（^*P＜0.05）。（D）两组γ-谷氨酰转肽酶水平的对比，胆汁淤积组γ-谷氨酰转肽酶水平较对照组升高（^***P＜0.001）。（E）两组谷草转氨酶水平的对比，胆汁淤积组谷草转氨酶水平较对照组升高（^***P＜0.001）。（F）两组谷丙转氨酶水平的对比，两组谷丙转氨酶水平无差异。

2.2 胆汁淤积增强肝细胞高表达细胞增殖基因

为了探究胆汁淤积对肝细胞的影响，本试验分离了原代肝细胞（图3A）。对照组原代肝细胞大小形态规则，胞膜完整，核质比均匀，而胆汁淤积组的原代肝细大小形态失衡，胞膜完整性降低，核质比不均匀（图3A）。RT-qPCR分析结果发现，与对照组肝细胞相比，胆汁淤积组原代肝细胞的细胞增殖标志物（Ki67）基因（图3B）、叉头盒 M1蛋白（Foxm1）基因（图3C）以及增殖细胞核抗原（Pcna）基因（图3D）的表达水平明显增加；同样胆汁淤积组肝细胞生长因子（Hgf）基因水平也明显升高（图3E）。由此可见，胆汁淤积可增强肝细胞高表达细胞增殖基因。

图 3 两组原代肝细胞中细胞增殖基因的对比。

注：（A）对照组和胆汁淤积组原代肝细胞培养第一天图像（×4）。（B）两组细胞增殖标志物Ki67基因的对比，胆汁淤积组Ki67水平较对照组增加（^****P＜0.0001）。（C）两组叉头盒 M1蛋白（Foxm1）基因的对比，胆汁淤积组Foxm1水平较对照组增加（^**P＜0.01）。（D）两组增殖细胞核抗原（Pcna）基因的对比，胆汁淤积组Pcna水平较对照组增加（^* P＜0.05）。（E）两组肝细胞生长因子Hgf基的对比，胆汁淤积组Hgf水平较对照组增加（^****P＜0.0001）。

2.3 胆汁淤积抑制肝细胞标志基因

进一步分析胆汁淤积对肝细胞相关标志基因的影响，RT-qPCR结果发现，与对照组肝细胞相比，胆汁淤积组原代肝细胞的肝细胞标志白蛋白（Albumin，Alb）基因（图4A）、肝细胞多药耐药相关蛋白2（Multidrug resistance-associated protein 2，Mrp2）基因（图4B）、肝细胞胆盐输出泵（Bile salt export pump，Bsep）基因（图4C）以及肝细胞连环蛋白［CCAAT/enhancer binding protein（C/EBP），beta 1，Catenin1］基因（图4D）的表达水平明显降低。可见，胆汁淤积可抑制肝细胞标志基因表达。

图 4 两组原代肝细胞中肝细胞标志基因的比较。

注：（A）两组中白蛋白（Alb）基因的对比，胆汁淤积组Alb水平较对照组降低（^**P＜0.01）。（B）两组中多药耐药相关蛋白2（Mrp2）基因的对比，胆汁淤积组Mrp2水平较对照组降低（^****P＜0.0001）。（C）两组中肝细胞胆盐输出泵（Bsep）基因的对比，胆汁淤积组Bsep水平较对照组降低（^***P＜0.001）。（D）两组中肝细胞连环蛋白（Catenin1）基因的对比，胆汁淤积组Catenin1水平较对照组降低（^* P＜0.05）。

2.4 胆汁淤积促进肝细胞高表达胆管细胞标志基因

通过RT-qPCR检测肝细胞中胆管细胞标志基因的表达，结果发现，与对照组肝细胞相比，胆汁淤积组原代肝细胞中的胆管标志基因如细胞角蛋白7（Cytokeratin 7，CK7）基因（图5A）、细胞角蛋白19（Cytokeratin 19，CK19）基因（图5B）、胆管细胞囊性纤维化跨膜传导调节因子（Cystic fibrosis transmembrane conductance regulator，Cftr）基因（图5C）以及胆管细胞多药耐药性蛋白（Multidrug resistance protein 1，Mdr1）基因（图5D）的表达水平明显增加。进一步检测肝祖细胞标志基因如上皮细胞黏附分子（Epithelial cell adhesion molecule，Epcam）以及Y染色体性别决定区-盒转录因子9（SRY-box transcription factor 9，Sox9）基因的表达，结果发现，胆汁淤积明显上调原代肝细胞中肝祖细胞标志基因Epcam（图6A）以及Sox9（图6B）的表达。

图 5 两组原代肝细胞中胆管细胞标志基因的比较。

注：（A）两组中细胞角蛋白7（Ck7）基因的对比，胆汁淤积组Ck7水平较对照组增加（^***P＜0.001）。（B）两组中细胞角蛋白19（Ck19）基因的对比，胆汁淤积组Ck19水平较对照组增加（^***P＜0.001）。（C）两组中囊性纤维化跨膜传导调节因子（Cftr）基因的对比，胆汁淤积组Cftr水平较对照组增加（^**P＜0.01）。（D）两组中多药耐药性蛋白（Mdr1）基因的对比，胆汁淤积组Mdr1水平较对照组增加（^***P＜0.001）。

图 6 两组原代肝细胞中肝祖细胞标志基因的比较。

注：（A）两组中上皮细胞粘附分子（Epcam）基因的对比，胆汁淤积组Epcam水平较对照组增加（^***P＜0.001）。（B）两组中Y染色体性别决定区-盒转录因子 9（Sox9）基因的对比，胆汁淤积组Sox9水平较对照组增加（^****P＜0.0001）。

3 讨论

胆道梗阻是临床上较为常见的导致胆汁淤积的病因。随着生活水平在逐渐提高，胆管结石引起胆道梗阻胆汁淤积的情况逐年增加。急慢性的胆汁淤积引起肝脏病理生理的紊乱，导致胆汁淤积性肝病的发生。胆管结扎是一种常见的诱导胆管梗阻形成肝外胆汁淤积性肝病的技术手段。本实验中，胆管结扎两周的大鼠模型表现为剧烈的肝功能的损害，一方面体现为血清总胆红素水平、碱性磷酸酶水平、γ-谷氨酰转肽酶水平、谷草转氨酶水平的显著升高以及肝脏合成白蛋白的能力下降；另一方面表现在以肝组织结构紊乱，肝小叶的显著增生以及纤维胶原蛋白的大量沉积等肝脏纤维化特征上。这与Fukasawa等^［13］、Tang等^［14］以及Laderian等^［15］的研究结果一致。本研究中采用胆管结扎2周这一时间点分析，一方面可以观察到较为明确且明显的胆汁淤积性肝脏病理生理变化；另一方面，这也符合临床上大多数胆汁淤积病例多为长期的慢性的疾病病程。

研究表明肝脏实质细胞在应对应激和损害时具有很高的可塑性潜力^［16］。在正常肝脏中，肝细胞坏死或凋亡后通常由肝小叶内临近肝细胞分裂增殖更新。在疾病进展过程中，肝脏实质细胞发生显著改变。Tarlow等^［17］的研究表明，人和小鼠肝细胞可以在损伤时进行可逆性胆管化生并有助于肝细胞的恢复；Yanger等^［18］使用细胞谱系示踪证明肝细胞在损伤后可广泛地进行肝细胞到胆管细胞的重新编程。Aguilar-Bravo等^［19］对酒精相关性肝病的肝胆细胞的转录谱系分析发现肝细胞到胆道重新编程的新驱动力为C-X-C基序趋化因子受体4。这些结果均表明肝细胞向胆管细胞的转分化的可塑性。也有高质量的研究表明，在一定程度的肝脏损伤恢复期间，胆管细胞也能够转分化为肝细胞^［20］，在晚期重度肝硬化等肝脏遭受重度损伤的情况下，胆管细胞转分化是新生肝细胞的主要细胞来源^［21］。在此分化过程中，胆管细胞会首先去分化为双潜能细胞，然后再分化为肝细胞和胆管细胞来实现肝脏再生。这些结果均表明胆管细胞向肝细胞的转分化的可塑性。本研究发现胆汁淤积的病理状态下，肝细胞发生向胆管细胞特征转化改变，表现为原代肝细胞高表达胆管细胞标记基因，如Ck7、Ck19、Mdr1、Cftr等，同时低表达肝细胞标志基因，如Alb、Mrp2、Bsep和Catenin1等。这说明在胆汁淤积的病理条件下，肝细胞转变为胆管细胞表型，这一现象即肝细胞胆管化^［22］。

目前研究证据表明肝细胞-胆管细胞转化可发生在各种急慢性肝胆道损伤或修复过程中。Michalopoulos等^［22］将二肽基肽酶IV（Dipeptidyl peptidase IV，DPPIV）阳性大鼠中分离的肝细胞移植到 DPPIV阴性大鼠体内以产生嵌合体肝脏。在该模型中，47.5% 的胆管细胞在胆管结扎以及4，4’-亚甲基二苯胺引起的胆管损伤的处理下表现为DPPIV阳性，这表明肝细胞在严重胆道损伤期间可分化为胆管细胞^［22］。Yovchev等^［23］的研究将DPPIV阳性大鼠中分离的肝细胞移植到DPPIV阴性大鼠中，发现一些再生的胆管细胞在胆管结扎后表现为 CK19阳性和 DPPIV阳性细胞，这也表明这些胆管细胞是肝细胞来源的。Yanger等^［18］通过胆管结扎或3，5-二乙氧基羰基-1，4-二氢-2，4，6-三甲基吡啶（3，5-diethoxycarbonyl-1，4-dihydrocollidine，DDC）饮食引起的胆道损伤模型中发现，肝细胞的形态发生变化并表达骨桥蛋白和 SOX9 标记物，表明肝细胞转分化为胆管细胞。Tarlow等^［17］将纯化的荧光标记的肝细胞移植到小鼠体内，体内示踪结果发现这些细胞在DDC饮食6周后观察到肝细胞来源的胆管细胞，并且通过 RNA-seq 分析的肝细胞来源的胆管细胞的基因表达谱与胆管细胞的基因表达谱不同，结果表明肝细胞可在体内直接转分化为胆道表型，Font-Burgada等^［24］在Hering管中鉴定了表达SOX9和肝细胞核因子4α的混合肝细胞。这些肝细胞在四氯化碳引起的急性肝损伤期间表现出强劲的增殖并有助于肝细胞再生，并且在3周的DDC饮食引起的胆汁淤积性肝损伤期间它们也分化为胆管细胞。这表明混合肝细胞可能具有足够的可塑性，可以根据特定的肝损伤分化为肝细胞或胆管细胞^［24］。同样地，本研究结果初步发现在梗阻型胆汁淤积状态下，肝细胞在一定程度上也发生了向胆管细胞转化的现象。

本研究结果还发现，胆汁淤积下的肝细胞高表达细胞增殖基因，说明肝细胞在胆汁淤积的条件下高增殖特性。邱冰峰等^［25］认为肝细胞向胆管上皮细胞转分化可能是继发性胆汁淤积性大鼠肝纤维化形成过程中的关键病理环节。本试验结果也发现胆汁淤积下肝脏纤维胶原蛋白的大量沉积。肝细胞胆管化过程中也高表达肝祖细胞标志基因Epcam和Sox9。EpCAM通过激活Notch1信号传导抑制体外人肝祖细胞向肝细胞的分化^［26］。Sox9是肝前体细胞分化和胆管系统形成的关键调节因子，SOX9阳性细胞被认为是肝祖细胞，可以分化为肝细胞和胆管细胞。SOX9还参与肝细胞命运决定和转分化，在肝脏损伤后促进肝细胞向胆管细胞的转化^［27］。由此可见，胆汁淤积下肝细胞胆管化具有肝祖细胞特性，其中Sox9相关信号途径可能是参与肝细胞胆管化进程的重要调节途径。

目前对于肝细胞-胆管细胞转化发生的关键信号途径及表达因子尚不完全清楚。Lee等^［28］利用斑马鱼模型发现肝细胞-胆管细胞的转分化过程是不依赖于增殖的，且发现NOTCH 和 YAP 信号传导相互作用同时控制该过程的发生。Lan等^［29］的结果也发现肝细胞-胆管细胞转分化可通过环氧化酶2/转化生长因子β/连环蛋白通路介导产生非典型胆管细胞。Chen等^［30］的研究揭示了成熟肝细胞的表型可塑性，发现谷氨酰胺转移酶2通过调节骨形态发生蛋白信号通路控制肝细胞-胆管细胞的转分化过程。Xu等^［31］利用DDC饮食诱导的肝损伤模型实验发现，紧密连接蛋白2可负调控YAP/TAZ介导的肝细胞向胆管细胞的转分化。Hu等^［5］分析了肝细胞驱动的胆管细胞癌发展的临床相关性和分子机制，其研究发现NOTCH/YAP1/DNMT1信号通路轴可驱动肝细胞重编程为肝内胆管细胞癌。抑制YAP1会损害肝细胞到胆管上皮细胞的重编程，这表明在一定程度上可通过使用YAP1相关抑制剂阻断胆汁淤积性胆管细胞癌的发生发展。这些相关信号及关键因子的发现将有助于针对这些关键因子筛选关键分子药物，或抑制或增强肝细胞-胆管细胞转分化过程达到治疗目的。本研究中我们发现肝细胞胆管化过程中也高表达肝祖细胞标志基因Epcam和Sox9，这可能是慢性胆汁淤积性肝损害中肝细胞-胆管细胞转分化的关键调节因子，但仍需要通过增强或抑制试验进一步证实，这也是后续研究的重要关注点。

本研究尚存在一些不足。如，本初步研究的样本量相对较小，可能存在一定的生物学变异性；再如，肝细胞具有一定的细胞异质性，本研究分析对象为全肝原代肝细胞，未对不同性质肝细胞进行区分；另外，本研究仅展示了肝细胞在胆汁淤积条件下向胆管细胞特性转化的现象，提出来Epcam和Sox9可能是胆汁淤积性肝损害中肝细胞-胆管细胞转分化的关键调节因子，但未能通过基因增强或基因敲除进一步探究其具体的分子调节机制。故结合单细胞测序技术的未来研究进一步分析胆汁淤积下肝细胞-胆管化特性的具体机制很有必要。肝细胞转分化可为胆汁淤积的治疗提供新的方向^［32］。

综上所述，本研究初步探究了梗阻性胆汁淤积对大鼠肝脏肝细胞的影响，结论表明胆汁淤积可诱导肝细胞向胆管细胞特性转化，Epcam和Sox9可能是关键调节因子，但其具体分子机制有待进一步深入研究。

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4、TERADA%E2%80%83M%EF%BC%8CHORISAWA%E2%80%83K%EF%BC%8CMIURA%E2%80%83S%EF%BC%8Cet%E2%80%83al%EF%BC%8E%0AKupffer%E2%80%83%20cells%E2%80%83induce%E2%80%83%20Notch-mediated%E2%80%83%20hepatocyte%E2%80%83%0Aconversion%E2%80%83in%E2%80%83a%E2%80%83common%E2%80%83mouse%E2%80%83model%E2%80%83of%E2%80%83intrahepatic%E2%80%83%0Acholangiocarcinoma%EF%BC%BBJ%EF%BC%BD%EF%BC%8ESci%E2%80%83Rep%EF%BC%8C2016%EF%BC%886%EF%BC%89%EF%BC%9A%0A34691%EF%BC%8E

5、HU%E2%80%83S%EF%BC%8CMOLINA%E2%80%83L%EF%BC%8CTAO%E2%80%83J%EF%BC%8Cet%E2%80%83al%EF%BC%8ENOTCH-YAP1%2F%0ATEAD-DNMT1%E2%80%83axis%E2%80%83drives%E2%80%83hepatocyte%E2%80%83%20reprogramming%E2%80%83%0Ainto%E2%80%83intrahepatic%E2%80%83cholangiocarcinoma%EF%BC%BBJ%EF%BC%BD%EF%BC%8E%0AGastroenterology%EF%BC%8C2022%EF%BC%8C163%EF%BC%882%EF%BC%89%EF%BC%9A449-465%EF%BC%8E

6、SEKIYA%E2%80%83S%EF%BC%8CSUZUKI%E2%80%83A%EF%BC%8EHepatocytes%EF%BC%8Crather%E2%80%83than%E2%80%83%0Acholangiocytes%EF%BC%8Ccan%E2%80%83be%E2%80%83the%E2%80%83major%E2%80%83source%E2%80%83of%E2%80%83primitive%E2%80%83%0Aductules%E2%80%83in%E2%80%83the%E2%80%83chronically%E2%80%83injured%E2%80%83mouse%E2%80%83liver%EF%BC%BBJ%EF%BC%BD%EF%BC%8E%0AAm%E2%80%83J%E2%80%83Pathol%EF%BC%8C2014%EF%BC%8C184%EF%BC%885%EF%BC%89%EF%BC%9A1468-1478%EF%BC%8E

7、SUZUKI%E2%80%83A%EF%BC%8EEvidence%E2%80%83%20of%E2%80%83%20cell-fate%E2%80%83%20conversion%E2%80%83from%E2%80%83%0Ahepatocytes%E2%80%83to%E2%80%83cholangiocytes%E2%80%83in%E2%80%83the%E2%80%83injured%E2%80%83liver%EF%BC%9AIn%02vivo%E2%80%83genetic%E2%80%83lineage-tracing%E2%80%83approaches%EF%BC%BBJ%EF%BC%BD%EF%BC%8ECurr%E2%80%83%0AOpin%E2%80%83Gastroenterol%EF%BC%8C2015%EF%BC%8C31%EF%BC%883%EF%BC%89%EF%BC%9A247-251%EF%BC%8E

8、HUANG%E2%80%83D%EF%BC%8CTANG%E2%80%83L%EF%BC%8CLI%E2%80%83T%EF%BC%8Cet%E2%80%83al%EF%BC%8EReversine%E2%80%83%0Aattenuates%E2%80%83cholestatic%E2%80%83ductular%E2%80%83reaction%E2%80%83in%E2%80%83rats%EF%BC%BBJ%EF%BC%BD%EF%BC%8E%0AFEBS%E2%80%83Open%E2%80%83Bio%EF%BC%8C2023%EF%BC%8C13%EF%BC%885%EF%BC%89%EF%BC%9A898-911%EF%BC%8E

9、ZHANG%E2%80%83S%EF%BC%8CHUANG%E2%80%83D%EF%BC%8CWENG%E2%80%83J%EF%BC%8Cet%E2%80%83al%EF%BC%8E%0ANeutralization%E2%80%83of%E2%80%83interleukin%E2%80%9017%E2%80%83attenuates%E2%80%83cholestatic%E2%80%83%0Aliver%E2%80%83fibrosis%E2%80%83in%E2%80%83mice%EF%BC%BBJ%EF%BC%BD%EF%BC%8EScand%E2%80%83J%E2%80%83Immunol%EF%BC%8C%0A2016%EF%BC%8C83%EF%BC%882%EF%BC%89%EF%BC%9A102-108%EF%BC%8E

10、HUANG%E2%80%83Y%EF%BC%8CSAKAI%E2%80%83Y%EF%BC%8CHARA%E2%80%83T%EF%BC%8Cet%E2%80%83al%EF%BC%8E%0ABioengineering%E2%80%83of%E2%80%83a%E2%80%83CLiP%E2%80%90derived%E2%80%83tubular%E2%80%83biliary%E2%80%90%0Aduct%E2%80%90like%E2%80%83structure%E2%80%83for%E2%80%83bile%E2%80%83transport%E2%80%83in%E2%80%83vitro%EF%BC%BBJ%EF%BC%BD%EF%BC%8E%0ABiotechnol%E2%80%83Bioeng%EF%BC%8C2021%EF%BC%8C118%EF%BC%887%EF%BC%89%EF%BC%9A2572-2584%EF%BC%8E

11、HUANG%E2%80%83Y%EF%BC%8CMIYAMOTO%E2%80%83D%EF%BC%8CLI%E2%80%83P%E2%80%83L%EF%BC%8Cet%E2%80%83al%EF%BC%8E%0AChemical%E2%80%83conversion%E2%80%83of%E2%80%83aged%E2%80%83hepatocytes%E2%80%83into%E2%80%83bipotent%E2%80%83%0Aliver%E2%80%83progenitor%E2%80%83cells%EF%BC%BBJ%EF%BC%BD%EF%BC%8EHepatol%E2%80%83Res%EF%BC%8C2021%EF%BC%8C51%0A%EF%BC%883%EF%BC%89%EF%BC%9A323-335%EF%BC%8E

12、SCHMITTGEN%E2%80%83T%E2%80%83D%EF%BC%8CLIVAK%E2%80%83K%E2%80%83J%EF%BC%8EAnalyzing%E2%80%83real-time%E2%80%83%0APCR%E2%80%83data%E2%80%83by%E2%80%83the%E2%80%83comparative%E2%80%83C%EF%BC%88T%EF%BC%89method%EF%BC%BBJ%EF%BC%BD%EF%BC%8ENat%E2%80%83%0AProtoc%EF%BC%8C2008%EF%BC%8C3%EF%BC%886%EF%BC%89%EF%BC%9A1101-1108%EF%BC%8E

13、FUKASAWA%E2%80%83H%EF%BC%8CHASHIMOTO%E2%80%83R%EF%BC%8CHAGIHARA%E2%80%83%0AK%EF%BC%8Cet%E2%80%83al%EF%BC%8EHistological%E2%80%83%20species%E2%80%83%20differences%E2%80%83%20among%E2%80%83%0Achickens%EF%BC%8Crats%EF%BC%8Cand%E2%80%83mice%E2%80%83in%E2%80%83experimental%E2%80%83cholestasis%E2%80%83%0Aby%E2%80%83bile%E2%80%83duct%E2%80%83ligation%EF%BC%BBJ%EF%BC%BD%EF%BC%8ERes%E2%80%83Vet%E2%80%83Sci%EF%BC%8C2024%0A%EF%BC%88176%EF%BC%89%EF%BC%9A105343%EF%BC%8E

14、TANG%E2%80%83G%EF%BC%8CNIERATH%E2%80%83W%E2%80%83F%EF%BC%8CLEITNER%E2%80%83E%EF%BC%8Cet%E2%80%83al%EF%BC%8E%0AComparing%E2%80%83%20animal%E2%80%83%20well-being%E2%80%83%20between%E2%80%83%20bile%E2%80%83%20duct%E2%80%83%0Aligation%E2%80%83models%EF%BC%BBJ%EF%BC%BD%EF%BC%8EPLoS%E2%80%83One%EF%BC%8C2024%EF%BC%8C19%EF%BC%887%EF%BC%89%EF%BC%9A%0Ae0303786%EF%BC%8E

15、%E2%80%83%20LADERIAN%E2%80%83A%EF%BC%8CGHASEMI%E2%80%83M%EF%BC%8CMORTAZAVI%E2%80%83P%EF%BC%8C%0Aet%E2%80%83al%EF%BC%8EHepatoprotective%E2%80%83effect%E2%80%83of%E2%80%83astaxanthin%E2%80%83against%E2%80%83%0Acholestasis%E2%80%83liver%E2%80%83fibrosis%E2%80%83induced%E2%80%83by%E2%80%83bile%E2%80%83duct%E2%80%83ligation%E2%80%83%0Ain%E2%80%83adult%E2%80%83Wistar%E2%80%83rats%EF%BC%BBJ%EF%BC%BD%EF%BC%8EJ%E2%80%83Biochem%E2%80%83Mol%E2%80%83Toxicol%EF%BC%8C%0A2024%EF%BC%8C38%EF%BC%888%EF%BC%89%EF%BC%9Ae23788%EF%BC%8E

16、GRIBBEN%E2%80%83C%EF%BC%8CGALANAKIS%E2%80%83V%EF%BC%8CCALDERWOOD%E2%80%83A%EF%BC%8C%0Aet%E2%80%83al%EF%BC%8EAcquisition%E2%80%83%20of%E2%80%83%20epithelial%E2%80%83%20plasticity%E2%80%83in%E2%80%83%20human%E2%80%83%0Achronic%E2%80%83liver%E2%80%83disease%EF%BC%BBJ%EF%BC%BD%EF%BC%8ENature%EF%BC%8C2024%EF%BC%8C630%0A%EF%BC%888015%EF%BC%89%EF%BC%9A166-173%EF%BC%8E

17、TARLOW%E2%80%83B%E2%80%83D%EF%BC%8CPELZ%E2%80%83C%EF%BC%8CNAUGLER%E2%80%83W%E2%80%83E%EF%BC%8Cet%E2%80%83al%EF%BC%8E%0ABipotential%E2%80%83%20adult%E2%80%83liver%E2%80%83%20progenitors%E2%80%83%20are%E2%80%83%20derived%E2%80%83from%E2%80%83%0Achronically%E2%80%83injured%E2%80%83mature%E2%80%83hepatocytes%EF%BC%BBJ%EF%BC%BD%EF%BC%8ECell%E2%80%83%0AStem%E2%80%83Cell%EF%BC%8C2014%EF%BC%8C15%EF%BC%885%EF%BC%89%EF%BC%9A605-618%EF%BC%8E

18、YANGER%E2%80%83K%EF%BC%8CZONG%E2%80%83Y%EF%BC%8CMAGGS%E2%80%83L%E2%80%83R%EF%BC%8Cet%E2%80%83al%EF%BC%8ERobust%E2%80%83%0Acellular%E2%80%83%20reprogramming%E2%80%83occurs%E2%80%83%20spontaneously%E2%80%83%20during%E2%80%83%0Aliver%E2%80%83regeneration%EF%BC%BBJ%EF%BC%BD%EF%BC%8EGenes%E2%80%83Dev%EF%BC%8C2013%EF%BC%8C27%0A%EF%BC%887%EF%BC%89%EF%BC%9A719-724%EF%BC%8E

19、AGUILAR-BRAVO%E2%80%83B%EF%BC%8CARINO%E2%80%83S%EF%BC%8CBLAYA%E2%80%83D%EF%BC%8Cet%E2%80%83al%EF%BC%8E%0AHepatocyte%E2%80%83dedifferentiation%E2%80%83profiling%E2%80%83in%E2%80%83alcohol%02related%E2%80%83liver%E2%80%83disease%E2%80%83identifies%E2%80%83CXCR4%E2%80%83as%E2%80%83a%E2%80%83driver%E2%80%83of%E2%80%83cell%E2%80%83%0Areprogramming%EF%BC%BBJ%EF%BC%BD%EF%BC%8EJ%E2%80%83Hepatol%EF%BC%8C2023%EF%BC%8C79%EF%BC%883%EF%BC%89%EF%BC%9A%0A728-740%EF%BC%8E

20、RAVEN%E2%80%83A%EF%BC%8CLU%E2%80%83W%E2%80%83Y%EF%BC%8CMAN%E2%80%83T%E2%80%83Y%EF%BC%8Cet%E2%80%83al%EF%BC%8E%0ACholangiocytes%E2%80%83act%E2%80%83as%E2%80%83facultative%E2%80%83liver%E2%80%83stem%E2%80%83cells%E2%80%83during%E2%80%83%0Aimpaired%E2%80%83hepatocyte%E2%80%83regeneration%EF%BC%BBJ%EF%BC%BD%EF%BC%8ENature%EF%BC%8C%0A2017%EF%BC%8C547%EF%BC%887663%EF%BC%89%EF%BC%9A350-354%EF%BC%8E

21、HE%E2%80%83J%EF%BC%8CLU%E2%80%83H%EF%BC%8CZOU%E2%80%83Q%EF%BC%8Cet%E2%80%83al%EF%BC%8ERegeneration%E2%80%83%20of%E2%80%83%0Aliver%E2%80%83%20after%E2%80%83%20extreme%E2%80%83%20hepatocyte%E2%80%83loss%E2%80%83%20occurs%E2%80%83%20mainly%E2%80%83%0Avia%E2%80%83biliary%E2%80%83transdifferentiation%E2%80%83in%E2%80%83zebrafish%EF%BC%BBJ%EF%BC%BD%EF%BC%8E%0AGastroenterology%EF%BC%8C2014%EF%BC%8C146%EF%BC%883%EF%BC%89%EF%BC%9A789-800%EF%BC%8Ee8%EF%BC%8E

22、%E2%80%83%20MICHALOPOULOS%E2%80%83G%E2%80%83K%EF%BC%8CBARUA%E2%80%83L%EF%BC%8CBOWEN%E2%80%83W%E2%80%83C%EF%BC%8E%0ATransdifferentiation%E2%80%83of%E2%80%83rat%E2%80%83hepatocytes%E2%80%83into%E2%80%83biliary%E2%80%83cells%E2%80%83%0Aafter%E2%80%83bile%E2%80%83duct%E2%80%83ligation%E2%80%83and%E2%80%83toxic%E2%80%83biliary%E2%80%83injury%EF%BC%BBJ%EF%BC%BD%EF%BC%8E%0AHepatology%EF%BC%8C2005%EF%BC%8C41%EF%BC%883%EF%BC%89%EF%BC%9A535-544%EF%BC%8E

23、YOVCHEV%E2%80%83M%E2%80%83I%EF%BC%8CLOCKER%E2%80%83J%EF%BC%8COERTEL%E2%80%83M%EF%BC%8EBiliary%E2%80%83%0Afibrosis%E2%80%83%20drives%E2%80%83%20liver%E2%80%83%20repopulation%E2%80%83%20and%E2%80%83%20phenotype%E2%80%83%0Atransition%E2%80%83of%E2%80%83transplanted%E2%80%83hepatocytes%EF%BC%BBJ%EF%BC%BD%EF%BC%8EJ%E2%80%83Hepatol%EF%BC%8C2016%EF%BC%8C64%EF%BC%886%EF%BC%89%EF%BC%9A1348-1357%EF%BC%8E

24、%E2%80%83%20FONT-BURGADA%E2%80%83J%EF%BC%8CSHALAPOUR%E2%80%83S%EF%BC%8CRAMASWAMY%E2%80%83%0AS%EF%BC%8Cet%E2%80%83al%EF%BC%8EHybrid%E2%80%83%20periportal%E2%80%83%20hepatocytes%E2%80%83%20regenerate%E2%80%83%0Athe%E2%80%83injured%E2%80%83liver%E2%80%83without%E2%80%83giving%E2%80%83rise%E2%80%83to%E2%80%83cancer%EF%BC%BBJ%EF%BC%BD%EF%BC%8E%0ACell%EF%BC%8C2015%EF%BC%8C162%EF%BC%884%EF%BC%89%EF%BC%9A766-779%EF%BC%8E

25、邱冰峰，都金星，申定珠，等．肝细胞向胆管上皮细胞转分化在继发性胆汁淤积性大鼠肝纤维化形成中的作用及黄芪汤组分的干预效应［J］．中国中西医结合杂志，2010，30（5）：513-518．

26、%E2%80%83%20TANG%E2%80%83D%EF%BC%8CCHEN%E2%80%83Y%EF%BC%8CFU%E2%80%83G%E2%80%83B%EF%BC%8Cet%E2%80%83al%EF%BC%8EEpCAM%E2%80%83inhibits%E2%80%83%0Adifferentiation%E2%80%83%20of%E2%80%83%20human%E2%80%83liver%E2%80%83%20progenitor%E2%80%83%20cells%E2%80%83into%E2%80%83%0Ahepatocytes%E2%80%83in%E2%80%83vitro%E2%80%83by%E2%80%83activating%E2%80%83Notch1%E2%80%83signaling%EF%BC%BBJ%EF%BC%BD%EF%BC%8E%0ABiochem%E2%80%83Biophys%E2%80%83Res%E2%80%83Commun%EF%BC%8C2020%EF%BC%8CS0006-291X%0A%EF%BC%8820%EF%BC%8930309-0%EF%BC%8E

27、SHANG%E2%80%83T%EF%BC%8CJIANG%E2%80%83T%EF%BC%8CCUI%E2%80%83X%EF%BC%8Cet%E2%80%83al%EF%BC%8EDive%20rse%E2%80%83%0Afunctions%E2%80%83of%E2%80%83SOX9%E2%80%83in%E2%80%83liver%E2%80%83development%E2%80%83and%E2%80%83homeostasis%E2%80%83%0Aand%E2%80%83hepatobiliary%E2%80%83diseases%EF%BC%BBJ%EF%BC%BD%EF%BC%8EGenes%E2%80%83Dis%EF%BC%8C2024%EF%BC%8C%0A11%EF%BC%884%EF%BC%89%EF%BC%9A100996%EF%BC%8E

28、LEE%E2%80%83S%E2%80%83H%20%EF%BC%8C%20SO%E2%80%83J%20%EF%BC%8C%20SHIN%E2%80%83D%20%EF%BC%8E%20Hepatocyte%02t%20o%20-%20c%20h%20ol%20a%20n%20gi%20o%20c%20yt%20e%E2%80%83%20c%20o%20n%20v%20e%20r%20si%20o%20n%E2%80%83%20o%20c%20c%20u%20r%20s%E2%80%83%20t%20h%20r%20o%20u%20g%20h%E2%80%83%0Atransdifferentiation%E2%80%83independently%E2%80%83of%E2%80%83%20proliferation%E2%80%83in%E2%80%83%0Azebrafish%EF%BC%BBJ%EF%BC%BD%EF%BC%8EHepatology%EF%BC%8C2023%EF%BC%8C77%EF%BC%884%EF%BC%89%EF%BC%9A%0A1198-1210%EF%BC%8E

29、LAN%E2%80%83T%EF%BC%8CTAI%E2%80%83Y%EF%BC%8CZHAO%E2%80%83C%EF%BC%8Cet%E2%80%83al%EF%BC%8EAt%20y%20pi%20c%20al%E2%80%83%0Acholangiocytes%E2%80%83derived%E2%80%83from%E2%80%83hepatocyte-cholangiocyte%E2%80%83%0Atransdifferentiation%E2%80%83mediated%E2%80%83by%E2%80%83COX-2%EF%BC%9AA%E2%80%83%20kind%E2%80%83of%E2%80%83%0Amisguided%E2%80%83liver%E2%80%83regeneration%EF%BC%BBJ%EF%BC%BD%EF%BC%8EInflamm%E2%80%83Regen%EF%BC%8C%0A2023%EF%BC%8C43%EF%BC%881%EF%BC%89%EF%BC%9A37%EF%BC%8E

30、CHEN%E2%80%83Y%EF%BC%8CYAN%E2%80%83Y%EF%BC%8CLI%E2%80%83Y%EF%BC%8Cet%E2%80%83al%EF%BC%8EDeletion%E2%80%83%20of%E2%80%83%0ATgm2%E2%80%83suppresses%E2%80%83BMP-mediated%E2%80%83hepatocyte-to%02cholangiocyte%E2%80%83metaplasia%E2%80%83in%E2%80%83ductular%E2%80%83reaction%EF%BC%BBJ%EF%BC%BD%EF%BC%8E%0ACell%E2%80%83Prolif%EF%BC%8C2024%EF%BC%8C57%EF%BC%8810%EF%BC%89%EF%BC%9Ae13646%EF%BC%8E

31、XU%E2%80%83J%EF%BC%8CKAUSALYA%E2%80%83P%E2%80%83J%EF%BC%8CONG%E2%80%83A%E2%80%83G%E2%80%83M%EF%BC%8Cet%E2%80%83al%EF%BC%8E%0AZO-2%2FTjp2%E2%80%83suppresses%E2%80%83Yap%E2%80%83and%E2%80%83Wwtr1%2FTaz-mediated%E2%80%83%0Ahepatocyte%E2%80%83to%E2%80%83%20cholangiocyte%E2%80%83transdifferentiation%E2%80%83in%E2%80%83%0Athe%E2%80%83mouse%E2%80%83liver%EF%BC%BBJ%EF%BC%BD%EF%BC%8ENPJ%E2%80%83Regen%E2%80%83Med%EF%BC%8C2022%EF%BC%8C7%0A%EF%BC%881%EF%BC%89%EF%BC%9A55%EF%BC%8E

32、张启迪，陆伦根．肝细胞转分化是肝内胆汁淤积治疗的新方向［J］．肝脏，2019，24（6）：611．

1、广东省医学科研基金项目（A2024088）；广州市科技计划项目（2024A03J1016）；广州市中医药和中西医结合科技项目（20242A011001）()