广州医药 ›› 2017, Vol. 48 ›› Issue (4): 38-41.DOI: 10.3969/j.issn.1000-8535.2017.04.009
肖密丝, 张莹莹, 郭敏, 许甜甜, 王长兵, 朱冰
XIAO Misi, ZHANG Yingying, GUO Min, XU Tiantian, WANG Changbing, ZHU Bing
摘要： 目的 利用大肠杆菌原核表达系统优化表达纯化肠道病毒71型(EV71)VP3结构蛋白,为后续单克隆抗体制备及检测试剂盒研发提供前期基础。方法 采用PCR方法扩增EV71病毒VP3基因,将其插入表达载体pET28a(+),构建pET28a-VP3重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,分别在25 ℃、37 ℃下经IPTG诱导表达,重组表达的蛋白产物经凝胶电泳初步分析,比较不同温度诱导表达的蛋白产物。结果 成功构建pET28a-VP3重组质粒,不同温度下诱导表达的蛋白产物在30.5 kDa左右位置均出现目的条带;37 ℃下诱导表达的蛋白超声破碎并离心后,目的蛋白基本位于沉淀中,而25 ℃诱导表达的蛋白产物有少量目的蛋白溶解于上清液中。结论 在25 ℃或37 ℃下均能利用大肠杆菌原核表达系统有效表达EV71病毒VP3蛋白;37 ℃诱导时蛋白可融性表达低,目的蛋白获取效率较高。
